miR-148b對胰腺癌生物學(xué)行為的影響及機制研究.pdf

1、背景和目的:MicroRNAs作為小鏈非編碼RNAs參與到各種生物學(xué)過程,參與腫瘤的發(fā)生和進展。部分腫瘤中發(fā)現(xiàn)miR-148b異常表達,但是它在胰腺癌中的表達和生物學(xué)效應(yīng)尚不明確。
　　方法:實時熒光定量PCR檢測miR-148b在胰腺癌組織和細胞系中的表達,通過χ2檢驗來檢測miR-148b和臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。轉(zhuǎn)染miR-148b類似物以上調(diào)其在胰腺癌細胞的表達,觀察miR-148b對胰腺癌細胞增殖和成瘤性的影響。通過流式細

2、胞技術(shù)檢測凋亡和細胞周期,通過transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲能力改變,雙熒光報告基因分析驗證miR-148b對AMPKα1的靶向調(diào)控作用,進一步通過實時熒光定量PCR和westernblot檢測miR-148b以及AMPKα1siRNA對AMPK表達的影響。通過實時熒光定量PCR和免疫組化檢測AMPKα1在胰腺癌中的表達,進一步通過沉默AMPKα1來評估AMPKα1對胰腺癌細胞增殖,凋亡,細胞周期,細胞侵襲和成瘤性的影響。

3、>　　結(jié)果:miR-148b在48例胰腺癌組織和5個胰腺癌細胞系中表達明顯低于癌周正常胰腺組織,其表達下調(diào)與腫瘤體積,TNM分期,淋巴結(jié)侵襲和遠處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。功能學(xué)研究顯示增加miR-148b的表達能明顯抑制胰腺癌細胞的增殖,誘導(dǎo)胰腺癌細胞凋亡和細胞周期阻滯在S期。同時,miR-148b能明顯抑制胰腺癌細胞的侵襲和裸鼠體內(nèi)成瘤。雙熒光素酶報告研究顯示miR-148bmimics能明顯降低AMPKα1的野生型3’UTR的熒光素酶活性,降

4、低AMPKα1在mRNA和蛋白的表達水平。同時,AMPKα1在胰腺癌組織中高表達,主要定位在癌細胞胞漿。這種高表達同miR-148b在胰腺癌中的表達呈負相關(guān)性。而下調(diào)AMPKα1明顯抑制了胰腺癌細胞的增殖和成瘤,同時誘導(dǎo)胰腺癌細胞的凋亡,細胞周期阻滯,和侵襲抑制。這種效應(yīng)同miR-148b的過表達效應(yīng)相一致。
　　結(jié)論:miR-148b通過靶向調(diào)控AMPKα1來抑制胰腺癌細胞的增殖和侵襲,在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮負性抑制作用,靶向調(diào)