miR-375對Hep-2細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，近年來喉癌的發(fā)病呈現(xiàn)出年輕化及上升趨勢。本研究以人喉癌細(xì)胞系為研究對象，分析轉(zhuǎn)染miR-375對Hep-2細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，并探討其可能的分子機(jī)制。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)研究設(shè)為miR-375 mimics組（轉(zhuǎn)染miR-375）、miR-NC組（轉(zhuǎn)染無義序列miR-NC）和空白對照組（未轉(zhuǎn)染）；采用脂質(zhì)體Lipofectamine2000將miR-375及miR-NC瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞；

2、熒光顯微鏡，觀察GFP熒光細(xì)胞數(shù)，檢測轉(zhuǎn)染效率；采用MTT法，檢測細(xì)胞生長增殖速度變化；運(yùn)用流式細(xì)胞儀，檢測細(xì)胞周期及凋亡；通過劃痕試驗(yàn)，觀察細(xì)胞遷移能力；利用生物信息學(xué)軟件，預(yù)測miR-375可能調(diào)控的靶基因；采用RT-PCR及Western Blot方法，分別從mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平，檢測IGF1R基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：miR-375導(dǎo)入Hep-2細(xì)胞，熒光檢測顯示，miR-375可在miR-375 mimics組Hep-

3、2細(xì)胞高表達(dá)；MTT檢測顯示，miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞生長增殖速度減慢，低于miR-NC組和空白對照組；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞處于亞G0/G1期細(xì)胞數(shù)目增加，高于miR-NC組和空白對照組；miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞凋亡增加，高于miR-NC組和空白對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞

4、遷移能力較miR-NC組和空白對照組降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；生物信息學(xué)TargetScan及PicTar軟件預(yù)測分析，提示miRNA調(diào)控的靶基因可能是IGF1R基因；RT-PCR及Western Blot檢測結(jié)果均顯示，miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞IGF1R表達(dá)水平降低，低于miR-NC組和空白對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、miR-375導(dǎo)入Hep-2細(xì)胞