缺氧誘導因子2α對肝癌細胞生物學行為的影響.pdf

1、本文旨在研究缺氧誘導因子-2α(hypoxiainduciblefactor-2alpha，HIF-2α)mRNA和蛋白在肝癌組織中的定性和定量表達，及其與肝癌組織臨床病理指標的相關關系，探討其在肝癌組織中表達的臨床意義；通過檢測并比較缺氧狀態(tài)下肝癌SMMC-7721細胞中HIF-1α和HIF-2α在不同時相的mRNA和蛋白量以及兩者的半衰期，探討HIF-1α和HIF-2α的時相差異表達意義及其可能的調(diào)節(jié)機制；并通過阻斷HIF-2α在肝

2、癌SMMC-7721細胞中的表達，研究HIF-2α對腫瘤細胞生長、黏附和侵襲能力的影響。 第一部分 HIF-1α和HIF-2α在肝癌細胞中的時相差異表達 目的：缺氧誘導因子2α與缺氧誘導因子1α結(jié)構(gòu)功能相似卻不可相互替代；兩者在缺氧過程中的表達不一致。本研究在檢測缺氧狀態(tài)下肝癌細胞中HIF-2α和HIF-1α的時相表達差異并探討其可能的調(diào)節(jié)機制和意義。 方法：以1％低氧培養(yǎng)箱模擬細胞低氧環(huán)境，檢測人肝癌S

3、MMC-7721細胞中HIF-1α和HIF-2αmRNA量和蛋白量，以及反義HIF-1α(naturalantisensehypoxiainduciblefactor-1α，aHIF)的mRNA量。同時應用氯化鈷(CoCl2)和轉(zhuǎn)錄抑制劑5，6-二氯苯并咪唑1-beta-D-呋喃核糖苷(5，6-dichlorobenzimidazole-1-beta-d-ribofuranoside，DRB)檢測HIF-1α和HIF-2αmRNA的半衰

4、期，評價HIF-1α和HIF-2αmRNA的穩(wěn)定性。 結(jié)果：急性缺氧迅速誘導HIF-1α蛋白和HIF-2α蛋白在細胞內(nèi)堆積。隨著缺氧時間延長HIF-1αmRNA的穩(wěn)定性下降，其蛋白表達降低，而HIF-2αmRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達以及aHIFmRNA持續(xù)增高。 結(jié)論：在較長時相的缺氧過程中，針對于腫瘤細胞對缺氧的適應性調(diào)節(jié)，以及在腫瘤的放療和化療抗性以及與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面，HIF-2α可能比HIF-1α起著更為重要的作用。

5、aHIF參與了HIF-1αmRNA的負反饋調(diào)節(jié)。 第二部分 HIF-2α在肝癌組織中的表達及其臨床意義 目的：研究缺氧誘導因子-2α(HIF-2α)mRNA及蛋白在肝癌組織中的表達。 方法：半定量RT-PCR法和免疫組織化學SP法檢測67例肝細胞肝癌(HCC)標本中HIF-2αmRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達。 結(jié)果：在67例肝癌標本中，HIF-2α陽性表達率為40.3％(27/67)，其陽性染色在肝癌細

6、胞、腫瘤新生血管內(nèi)皮中，主要在胞漿中表達，胞核中表達較少。在有肝癌壞死周邊組織中表達陽性率較高。統(tǒng)計分析顯示hif-2αmRNA轉(zhuǎn)錄和HIF-2α蛋白表達在大小肝癌之間、播散型與非播散型肝癌之間以及伴有壞死和無壞死肝癌之間均有顯著性差異(P＜0.05)；但肝癌各病理組織分級之間以及是否有肝門淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間無顯著性差異(P＞0.05)。相關分析顯示hif-2αmRNA轉(zhuǎn)錄與HIF-2α蛋白表達有顯著性相關(r=0.264，P＜0.05)。

7、結(jié)論：HIF-2α在肝癌組織中的表達較為普遍，其表達增高與肝癌的惡性生長有關，同時亦可能是促進肝癌細胞浸潤和轉(zhuǎn)移的一個因素。 第三部分 HIF-2α對肝癌細胞生長和侵襲能力的影響 目的：檢測在缺氧條件下缺氧誘導因子2α對肝癌SMMC-7721細胞生長、黏附和侵襲能力的影響。 方法：以1％低氧培養(yǎng)箱模擬細胞低氧環(huán)境下脂質(zhì)體Lipofectamine介導HIF-2α脫氧寡核苷酸轉(zhuǎn)染SMMC-7721肝癌細胞，測

8、轉(zhuǎn)染前后HIF-2αmRNA量和蛋白量檢驗轉(zhuǎn)染效果；MTT法測定細胞生長和粘附能力變化；Transwell小室測定細胞的體外侵襲能力。 結(jié)果：HIF-2αmRNA和蛋白表達在反義轉(zhuǎn)染組顯著低于正義組、隨機組與對照組(P＜0.01)。HIF-2α表達阻斷對細胞生長和活力無顯著性影響(P＞0.05)，但顯著抑制體外粘附能力(抑制率16.99％～31.07％，P＜0.01)和侵襲能力(抑制率17.9％，P＜0.01)。 結(jié)論：