沉默β-catenin表達對人胃癌細胞生物學行為的影響.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：406521611282南昌大學碩士研究生學位論文沉默沉默βcatenin表達對人胃癌細胞生物學表達對人胃癌細胞生物學行為的影響行為的影響SilencingβcatenininfluencetheBiologicalBehavisofGastricCancerCells潘安萍培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱：熊建萍教授申請學位的學科門類：醫(yī)學學科專業(yè)名稱：腫瘤學論文答辯日期：2014

2、年6月6日答辯委員會主席：評閱人：2014年6月摘要II摘要背景：背景：胃癌是一種常見疾病，多數(shù)患者被診斷時已屬晚期，錯失手術的機會，導致胃癌患者生存期短，生活質量差。近年來，βcatenin被發(fā)現(xiàn)是一種癌癥相關蛋白，被證明在多種腫瘤細胞中高表達。βcatenin除與癌細胞增殖、凋亡、侵襲轉移相關，還與腫瘤的化療敏感相關。但是目前對于βcatenin與腫瘤之間關系的研究多數(shù)是在腸癌、乳腺、肝癌等中進行，對于胃癌細胞的研究尚少。本研究希望

3、通過構建βcateninRNAi干擾慢病毒感染胃癌AGS、MGC803細胞株，下調(diào)胞內(nèi)βcatenin的表達來研究此蛋白對胃癌細胞生物學行為的影響。目的：目的：探討通過沉默胃癌AGS、MGC803細胞株細胞中βcatenin蛋白的表達，觀察βcatenin的表達量下調(diào)對此兩株胃癌細胞的增殖、凋亡、侵襲力以及5Fu敏感性的影響，并初步探討其分子機制，為胃癌的診治提供新思路。方法：方法：1.制作慢病毒載體βcateninRNAi433LV(

4、βcateninRNAi慢病毒液)及βcateninnegativeLV(空載體慢病毒液)，分別轉染胃癌AGS、MGC803細胞株。實驗分組：實驗組（感染βcateninRNAi慢病毒的AGSRNAi433、MGC803RNAi433）、陰性對照組（感染空載慢病毒的AGSNeg、MGC803Neg）、空白對照組（未處理的AGS、MGC803）。采用qRTPCR及Westernblot方法分別從mRNA及蛋白水平檢測各組細胞βcateni

5、n在胞內(nèi)表達情況；2.MTT法分別檢測各組細胞對5氟尿嘧啶（5Fu）敏感性的差異；3.采用Transwell小室法檢測各組細胞體外侵襲、遷移能力的差異；4.流式細胞術檢測各組細胞周期及凋亡的差異；5.Westernblot檢測各組細胞βcatenin下游靶基因編碼蛋白和5Fu代謝酶的差異。結果：結果：1.慢病毒成功感染胃癌細胞，得到穩(wěn)定轉染細胞株。qRTPCR及Westernblot檢測實驗組細胞在mRNA和蛋白水平上較對應陰性對照組均