沉默β-catenin表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：UDC：學(xué)號(hào)：406521611282南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文沉默沉默βcatenin表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞生物學(xué)表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響行為的影響SilencingβcatenininfluencetheBiologicalBehavisofGastricCancerCells潘安萍培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：熊建萍教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門(mén)類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：腫瘤學(xué)論文答辯日期：2014

2、年6月6日答辯委員會(huì)主席：評(píng)閱人：2014年6月摘要II摘要背景：背景：胃癌是一種常見(jiàn)疾病，多數(shù)患者被診斷時(shí)已屬晚期，錯(cuò)失手術(shù)的機(jī)會(huì)，導(dǎo)致胃癌患者生存期短，生活質(zhì)量差。近年來(lái)，βcatenin被發(fā)現(xiàn)是一種癌癥相關(guān)蛋白，被證明在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)。βcatenin除與癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)，還與腫瘤的化療敏感相關(guān)。但是目前對(duì)于βcatenin與腫瘤之間關(guān)系的研究多數(shù)是在腸癌、乳腺、肝癌等中進(jìn)行，對(duì)于胃癌細(xì)胞的研究尚少。本研究希望

3、通過(guò)構(gòu)建βcateninRNAi干擾慢病毒感染胃癌AGS、MGC803細(xì)胞株，下調(diào)胞內(nèi)βcatenin的表達(dá)來(lái)研究此蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。目的：目的：探討通過(guò)沉默胃癌AGS、MGC803細(xì)胞株細(xì)胞中βcatenin蛋白的表達(dá)，觀察βcatenin的表達(dá)量下調(diào)對(duì)此兩株胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲力以及5Fu敏感性的影響，并初步探討其分子機(jī)制，為胃癌的診治提供新思路。方法：方法：1.制作慢病毒載體βcateninRNAi433LV(

4、βcateninRNAi慢病毒液)及βcateninnegativeLV(空載體慢病毒液)，分別轉(zhuǎn)染胃癌AGS、MGC803細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)分組：實(shí)驗(yàn)組（感染βcateninRNAi慢病毒的AGSRNAi433、MGC803RNAi433）、陰性對(duì)照組（感染空載慢病毒的AGSNeg、MGC803Neg）、空白對(duì)照組（未處理的AGS、MGC803）。采用qRTPCR及Westernblot方法分別從mRNA及蛋白水平檢測(cè)各組細(xì)胞βcateni

5、n在胞內(nèi)表達(dá)情況；2.MTT法分別檢測(cè)各組細(xì)胞對(duì)5氟尿嘧啶（5Fu）敏感性的差異；3.采用Transwell小室法檢測(cè)各組細(xì)胞體外侵襲、遷移能力的差異；4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞周期及凋亡的差異；5.Westernblot檢測(cè)各組細(xì)胞βcatenin下游靶基因編碼蛋白和5Fu代謝酶的差異。結(jié)果：結(jié)果：1.慢病毒成功感染胃癌細(xì)胞，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。qRTPCR及Westernblot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在mRNA和蛋白水平上較對(duì)應(yīng)陰性對(duì)照組均