LIF在胃癌中的表達(dá)及對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、近年來隨著胃癌相關(guān)診療技術(shù)的不斷進(jìn)步，胃癌患者的總體生存率得到了顯著提高，但其整體治療效果仍不十分理想。腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移是其重要的惡性生物學(xué)行為，從根本上尋找腫瘤發(fā)生、發(fā)展及惡性生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)機(jī)制，可以有效提高胃癌的治療效果。
　　目的:
　　研究LIF在胃癌中的表達(dá)情況與病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后的相關(guān)性，評價(jià)其在胃癌診斷方面的價(jià)值，探索LIF對胃癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響，并進(jìn)一步探討具體作用機(jī)制。
　

2、　方法:
　　1.利用ELISA技術(shù)檢測208例胃癌患者、67例慢性萎縮性胃炎患者和70例正常人LIF因子外周血表達(dá)水平。免疫組織化學(xué)染色檢測128例胃癌石蠟切塊LIF和LIFR在組織中的表達(dá)。通過Western blot和qRT-PCR方法檢測40例胃癌新鮮組織樣本及配對的癌旁正常組織中LIF和LIFR蛋白和mRNA的表達(dá)情況，并與臨床病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后進(jìn)行相關(guān)性分析。2.篩選LIF低表達(dá)、LIFR高表達(dá)的胃癌細(xì)胞株（Wester

3、n blot和qRT-PCR方法）。利用RNA干擾技術(shù)，借助質(zhì)粒為載體，敲低胃癌細(xì)胞株中LIFR的表達(dá)。通過CCK-8、EdU和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測加入外源性LIF因子及沉默LIFR基因后，對胃癌細(xì)胞增殖能力的影響。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測LIF及沉默LIFR對胃癌細(xì)胞的細(xì)胞周期分布和凋亡的影響。采用Transwell實(shí)驗(yàn)觀察LIF及沉默LIFR對胃癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。通過裸鼠體內(nèi)成瘤模型探討LIF及沉默LIFR后對腫瘤生長的影響。3.

4、Western blot法和細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)檢測LIF對Hippo-YAP信號通路中核心元件的影響及相互關(guān)系。利用siRNA沉默信號通路下游YAP蛋白表達(dá)后，通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測LIF是否主要通過Hippo-YAP信號對胃癌細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響。
　　結(jié)果:
　　1.胃癌患者、慢性萎縮性胃炎患者、正常人外周血LIF水平分別為8.650±6.282pg/ml、4.325±1.824 pg/ml、3.344±1.918 pg/

5、ml。胃癌患者LIF水平明顯高于慢性萎縮性胃炎患者(P=0.003)和正常人(P＜0.001)。LIF診斷胃癌的界值為5.585 pg/ml，診斷敏感度:88.14％，特異度:81.82％，準(zhǔn)確度:85.64％。免疫組化結(jié)果顯示:LIF和LIFR在胃癌中的陽性表達(dá)率明顯高于正常粘膜(P＜0.001)，與腫瘤分化程度(P=0.021)、脈管浸潤(P=0.001)、T分期(P=0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001)及pTNM分期(P=0

6、.012)存在相關(guān)性。相同腫瘤組織中LIF與LIFR的蛋白表達(dá)量及mRNA含量呈正性相關(guān)(P＜0.001，P＜0.001)。利用Cox回歸多因素生存模型分析患者的預(yù)后相關(guān)因素發(fā)現(xiàn)LIF及LIFR與預(yù)后緊密相關(guān)，是獨(dú)立的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)因素(P=0.009，P=0.034)。2.MGC803細(xì)胞在幾種常見胃癌細(xì)胞系中LIF的表達(dá)量最低，LIFR的表達(dá)量最高。加入外源性LIF可以顯著增強(qiáng)細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移、抗凋亡能力和裸鼠體內(nèi)成瘤速度(P＜0.

7、001)。沉默LIFR后，與陰性對照組相比，細(xì)胞的上述惡性生物學(xué)行為能力被明顯減弱，且在LIFR被沉默的細(xì)胞中再次加入LIF無法發(fā)揮上述LIF的腫瘤促進(jìn)作用。3.LIF可以顯著降低Hippo-YAP信號通路中核心元件的磷酸化水平(P＜0.001)，并促進(jìn)YAP蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。另外，LIF無法促進(jìn)YAP-siRNA細(xì)胞的增殖。
　　結(jié)論:
　　1.LIF參與了胃癌內(nèi)在的發(fā)生過程，能夠用于胃癌的診斷，并且與胃癌的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移

8、及患者預(yù)后緊密相關(guān)。2.LIF可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為，而沉默LIFR可以抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。在LIFR表達(dá)被沉默后，再次加入LIF無法發(fā)揮其作用，提示LIF是與其受體LIFR結(jié)合，增強(qiáng)腫瘤的惡性生物學(xué)行為能力。3.LIF可以有效降低細(xì)胞內(nèi)MST1/2、LATS1和YAP磷酸化蛋白的含量，從而抑制了Hippo-YAP通路中的核心元件，最終促進(jìn)YAP的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。4.LIF在胃癌的發(fā)生、進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中起到了重