子癇前期差異表達(dá)基因LAIR-2對滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、背景與目的
　　胎盤是人類胚胎發(fā)育成熟、妊娠順利完成的基本要素。晚期囊胚著床之后，絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞(extravilloustrophoblastcell，EVT)向子宮蛻膜層和肌層血管的進(jìn)一步侵襲、遷移、分化是母-胎循環(huán)建立和胎盤錨定的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對胚胎發(fā)育、母胎間對話尤為重要。已證實，EVT侵襲性遷移不足可導(dǎo)致子宮螺旋動脈重鑄障礙，是自然流產(chǎn)、子癇前期-子癇、胎兒生長受限等疾病的重要病理過程;同時，滋養(yǎng)細(xì)胞過度侵襲則是胎盤植入、

2、胎盤附著部位異常的重要病理特征，滋養(yǎng)細(xì)胞惡性侵襲則最終可導(dǎo)致葡萄胎、絨癌等疾病。明確滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲性的調(diào)節(jié)機(jī)制，是解決上述疾病的關(guān)鍵問題與希望所在。
　　子癇前期及子癇是孕期以高血壓為主要特征的多系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重威脅母嬰健康，對其病因和發(fā)病機(jī)制的研究一直是產(chǎn)科的重要研究課題。多年來，通過幾代學(xué)者對子癇前期的研究，雖仍未明確其發(fā)病的機(jī)制，但卻形成了幾種發(fā)病學(xué)說:子宮螺旋小動脈重鑄不足、炎癥免疫過度激活、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、遺傳因素、營養(yǎng)缺

3、乏、胰島素抵抗等，其中子宮螺旋小動脈重鑄不足是目前比較公認(rèn)的觀點。自1914年有學(xué)者根據(jù)子癇前期臨床病征提出子宮缺血學(xué)說以來，現(xiàn)多數(shù)學(xué)者認(rèn)為子宮缺血實質(zhì)上是胎盤或滋養(yǎng)細(xì)胞缺血，其原因是子宮螺旋形小動脈生理重鑄過程障礙，此病理現(xiàn)象也稱之為“胎盤淺著床”，研究發(fā)現(xiàn)其與胚胎著床過程中滋養(yǎng)浸潤能力受累有關(guān)。近來的大量研究表明，滋養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)行為的改變可能與其相關(guān)基因表達(dá)異常從而導(dǎo)致一些影響滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲相關(guān)的蛋白酶或其它分子的分泌有關(guān)，另外可能

4、還與子宮局部激素、母胎界面的免疫狀況、細(xì)胞因子等內(nèi)環(huán)境的變化和一些控制胚胎和胎盤發(fā)育基因的表達(dá)有關(guān)。
　　我們通過基因表達(dá)譜芯片對子癇前期患者胎盤組織中差異表達(dá)的基因進(jìn)行篩選和分析，從中選出差異表達(dá)最明顯的基因LAIR-2，研究其不同表達(dá)情況下滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的改變，探討子癇前期差異表達(dá)基因?qū)ψ甜B(yǎng)細(xì)胞侵襲功能的影響及機(jī)制。
　　JEG-3細(xì)胞系來自人絨毛膜癌組織，其細(xì)胞形態(tài)、生化標(biāo)志、激素合成分泌等特征與原代絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞極

5、其相似。本研究基于JEG-3體外培養(yǎng)等實驗平臺，應(yīng)用構(gòu)建cDNA過表達(dá)及RNAi慢病毒載體與細(xì)胞轉(zhuǎn)染、Transwell、Westernblot、RT-PCR等實驗技術(shù)，研究并探討子癇前期差異表達(dá)基因LAIR-2對人滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的影響及可能的機(jī)制。
　　主要研究結(jié)果及結(jié)論如下:
　　1.本研究通過基因表達(dá)譜芯片共篩選出1000余種在子癇前期患者與正常妊娠相比胎盤組織中表達(dá)有差異的基因，其中實驗組中表達(dá)明顯上調(diào)且表達(dá)量的差

6、異超過3倍的基因共15種，表達(dá)下調(diào)且有明顯表達(dá)量差異的基因共14種，差異均有顯著性(P＜0.05)。這些基因有與妊娠相關(guān)性疾病有關(guān)的、有與細(xì)胞侵襲有關(guān)的、有與胚胎和胎盤發(fā)育相關(guān)而影響妊娠結(jié)局的、有與生殖功能相關(guān)的，還有些基因目前鮮有報道。這些研究結(jié)果為子癇前期在分子水平的研究提供了理論依據(jù)。
　　2.本實驗研究中，我們通過Westernblot和PCR技術(shù)對子癇前期患者晚孕胎盤組織與正常妊娠胎盤組織中LAIR-2的表達(dá)進(jìn)行對照研究

7、，結(jié)果顯示在子癇前期患者的晚孕胎盤組織中，LAIR-2mRNA及蛋白的表達(dá)均高于正常妊娠組，此結(jié)果驗證了第一部分的實驗結(jié)果，提示LAIR-2與子癇前期疾病密切相關(guān)。其在對子癇前期患者胎盤發(fā)育的影響及其因果關(guān)系尚待后續(xù)研究。
　　3.(1)通過基因重組技術(shù)構(gòu)建了LAIR-2cDNA過表達(dá)和RNA干擾重組慢病毒載體并成功穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了滋養(yǎng)細(xì)胞株。
　　(2)RNAi慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞降調(diào)了LAIR-2的表達(dá)，而cDNA過表達(dá)慢病

8、毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞同則上調(diào)了LAIR-2的表達(dá)。
　　(3)LAIR-2過表達(dá)和基因沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的成功建立，為今后LAIR-2功能研究奠定了基礎(chǔ)。
　　4、(1)子癇前期差異表達(dá)基因LAIR-2參加了滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)。
　　(2)LAIR-2影響滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力，LAIR-2表達(dá)上調(diào)后細(xì)胞上述能力減弱，反之其表達(dá)下調(diào)后，上述能力增強(qiáng)。
　　(3)LAIR-2影響滋養(yǎng)細(xì)胞MMPs的表達(dá)，LA