miR-31表達(dá)的抑制對(duì)胰腺癌panc-1細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制的初步探索.pdf

1、目的:采用RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染胰腺癌Panc-1細(xì)胞系,觀察抑制miR-31的表達(dá)對(duì)Panc-1細(xì)胞系增殖、凋亡、愈合能力、遷移及侵襲等能力的影響,探討miR-31表達(dá)的抑制對(duì)胰腺癌 panc-1細(xì)胞各種生物學(xué)行為的影響,并通過作用靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)和靶蛋白的檢測(cè),來初步預(yù)測(cè)miR-31調(diào)控panc-1細(xì)胞活動(dòng)的機(jī)制,為進(jìn)一步探索miR-31影響胰腺癌細(xì)胞各生物學(xué)行為的可能作用機(jī)制作基礎(chǔ),以服務(wù)于胰腺癌發(fā)病機(jī)制及治療方法的研究。
　　方法:

2、①設(shè)計(jì)制備針對(duì)miR-31的抑制子inhibitor,以脂質(zhì)體(lipofectamineTM2000)為載體轉(zhuǎn)染人胰腺癌細(xì)胞系Panc-1;②采用RT-PCR以檢測(cè)miR-31 inhibitor轉(zhuǎn)染后胰腺癌細(xì)胞系panc-1細(xì)胞miR-31在mRNA表達(dá)情況,驗(yàn)證miR-31的抑制效果,同時(shí)設(shè)計(jì)陽(yáng)性對(duì)照組;③分別采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)計(jì)算空白組、轉(zhuǎn)染組細(xì)胞及陽(yáng)性對(duì)照組的吸光度值檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞愈合

3、能力、transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化等,觀察miR-31的表達(dá)對(duì)Panc-1細(xì)胞的影響;④利用靶基因預(yù)測(cè)網(wǎng)站對(duì)miR-31靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè),篩選相關(guān)靶基因,通過western blot驗(yàn)證相關(guān)靶蛋白的表達(dá)情況,初步預(yù)測(cè)miR-31相關(guān)作用機(jī)制。
　　結(jié)果:①細(xì)胞數(shù)約為每孔1.5×105個(gè)、siRNA為100pmol,Lipofectamine2000與siRNA比例為5ul:5ul(6孔板)時(shí),有最佳的

4、轉(zhuǎn)染效率(90.6％),繼續(xù)提高siRNA濃度并不能明顯提高轉(zhuǎn)染效率;②轉(zhuǎn)染miR-31 inhibitors后轉(zhuǎn)染組細(xì)胞Panc-1的mRNA表達(dá)明顯下降(p<0.05);③轉(zhuǎn)染了miR-31 inhibitors的panc-1細(xì)胞創(chuàng)傷愈合能力、侵襲能力、遷移能力均明顯下降(p<0.05),但對(duì)增殖和凋亡能力的影響沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05);④所選靶蛋白中,RhoBTB1蛋白升高最為明顯。
　　結(jié)論:①抑制miR-31的表達(dá)