亞砷酸對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞中RASSF1A的表達(dá)影響及其可能機(jī)制的探討.pdf

1、目的:
　　 本研究以人胰腺癌PANC-1細(xì)胞作為研究對(duì)象，采用不同濃度的亞砷酸處理人胰腺癌PANC-1細(xì)胞，觀察其對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖的影響；比較亞砷酸作用前后抑癌基因RASSF1A表達(dá)的變化，并探討亞砷酸引起該基因表達(dá)變化的可能機(jī)制，為胰腺癌新的治療方案提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 MTT法檢測(cè)亞砷酸對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖的影響。處理組用濃度為4.8μmol/L、2.4μmol/L、1.2μmol/

2、L的亞砷酸加入人胰腺癌PANC-1細(xì)胞中，空白對(duì)照組不加藥物，作用48h后，采用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞中抑癌基因RASSF1A在亞砷酸處理前后mRNA水平的表達(dá)情況，采用甲基化特異性PCR(MSP)法檢測(cè)亞砷酸處理前后RASSF1A基因去甲基化的情況，用Quantity One軟件測(cè)量目的條帶灰度積值與內(nèi)參條帶灰度積值的比，進(jìn)行半定量分析。
　　 結(jié)果:
　　 (1)亞砷酸對(duì)胰腺癌細(xì)胞生

3、長(zhǎng)增殖的影響亞砷酸濃度在1.2μmol/L-4.8μmol/L濃度時(shí)，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞抑制率逐漸增加(P<0.05)；在作用時(shí)間相同時(shí)，隨著藥物濃度從1.2μmol/L到4.8μmol/L增加，抑制率也逐漸增加(P<0.05)。亞砷酸在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用具有時(shí)間和劑量效應(yīng)。
　　 (2)亞砷酸對(duì)胰腺癌細(xì)胞中RASSF1A mRNA表達(dá)的影響半定量RT-PCR分析人胰腺癌PANC-1中抑癌基因RASSF1A

4、 mRNA的表達(dá)，結(jié)果表明亞砷酸處理人胰腺癌PANC-1細(xì)胞48h后，隨著亞砷酸作用濃度的增加，抑癌基因RASSF1A mRNA表達(dá)逐漸增強(qiáng)。空白對(duì)照組和處理組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，不同處理組之間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。[3]亞砷酸處理前后RASSF1A的甲基化分析在細(xì)胞中，RASSF1A基因表現(xiàn)為高甲基化狀態(tài)，隨著亞砷酸作用濃度的增加，RASSF1A基因甲基化條帶的亮度逐漸減弱。但用亞砷酸作用48h后RA