沉默VDR基因影響胰腺癌PANC-1細(xì)胞對(duì)骨化三醇敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　本文通過(guò)研究骨化三醇作用于VDR基因沉默前后的胰腺癌PANC-1細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞凋亡和周期阻滯情況以及與凋亡和周期調(diào)節(jié)相關(guān)基因地表達(dá)變化，評(píng)價(jià)VDR基因表達(dá)對(duì)骨化三醇抗胰腺癌的影響，并進(jìn)一步探討相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法:
　　予以不同濃度骨化三醇處理胰腺癌PANC-1細(xì)胞，采用MTT比色法分別于作用24h、48h、72h后檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況，并篩選出合適地用藥時(shí)間與濃度;設(shè)計(jì)并合成三組VDR-siRNA，按說(shuō)

2、明書(shū)利用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染PANC-1細(xì)胞，并從中篩選出沉默效率最佳者;Hoechst33258熒光染色法觀察VDR基因沉默前后骨化三醇作用下細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞調(diào)亡和細(xì)胞周期阻滯情況;蛋白免疫印跡法(Western Blot)和逆轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(Rt-PCR)檢測(cè)凋亡、細(xì)胞周期相關(guān)基因(Caspase-3，Bcl-2，Bax，p21，p27)的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　

3、骨化三醇對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖具有顯著地抑制作用，且有時(shí)間、劑量依賴性。骨化三醇濃度在50nM時(shí)對(duì)PANC-1細(xì)胞地抑制效果最佳，細(xì)胞活性顯著降低。經(jīng)siRNA-VDR-1103轉(zhuǎn)染的PANC-1細(xì)胞VDR基因表達(dá)降低近91％。Hoechst33258染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)均顯示骨化三醇50nM干預(yù)24h可明顯誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞的凋亡和G0/G1期阻滯，干預(yù)48h后結(jié)果更顯著;VDR基因沉默后作用效果明顯降低。Wester

4、n Blot結(jié)果顯示，骨化三醇干預(yù)胰腺癌PANC-1細(xì)胞后Bax/Bcl-2比值變化不明顯，Caspase-3、p21和p27蛋白表達(dá)均明顯上調(diào);VDR基因沉默后，隨著骨化三醇干預(yù)Bax/Bcl-2比值反而較對(duì)照組降低，Caspase-3、p21和p27表達(dá)量也明顯降低，且隨著骨化三醇作用變化不明顯。Rt-PCR同樣佐證了上述結(jié)果。
　　結(jié)論:
　　1.骨化三醇可以誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞株的凋亡，促使細(xì)胞周期阻滯于G0/