曲古霉素A聯(lián)合環(huán)巴胺對胰腺癌PANC-1細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:本研究通過檢測單獨/聯(lián)合TSA、CYA用藥后胰腺癌PANC-1的細(xì)胞凋亡、凋亡相關(guān)基因表達(dá)的變化以及Hedgehog(Hh)信號通路的活性的改變，評價組蛋白去乙?；敢种苿┣琶顾谹(TSA)聯(lián)合Hedgehog(Hh)信號通路阻斷劑環(huán)巴胺(CYA)干預(yù)對胰腺癌PANC-1細(xì)胞凋亡的影響，并初步探討其機(jī)制。
　　方法:予以TSA、CYA單獨/聯(lián)合處理PANC-1細(xì)胞24h后，Hochest33258熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的

2、改變;采用CCK8方法檢測兩藥單獨/聯(lián)合處理對胰腺癌PANC-1細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用，并計算PANC-1細(xì)胞50％抑制濃度(IC50)以及兩藥聯(lián)合指數(shù)(CI);逆轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測凋亡相關(guān)基因以及Hh信號通路關(guān)鍵分子（Gli1, Gli3, Smo）mRNA表達(dá)的變化;蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2，Activated caspase-3，Activated caspas

3、e-8，Activated caspase-9)及Hh通路關(guān)鍵分子蛋白(Gli1，Smo，Ptc-1)表達(dá)的改變;細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記法(IF)檢測Gli1蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果: Hochest33258染色顯示，TSA、CYA均可明顯誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞凋亡，24h IC50分別為（0.51±0.07）μmol/L和（33.6±2.3）μmol/L，兩藥聯(lián)合指數(shù)為0.835，具有低度協(xié)同作用。TSA、CYA單獨/聯(lián)合干預(yù)

4、胰腺癌PANC-1細(xì)胞后，Bcl-2mRNA表達(dá)下降的同時上調(diào)Bax mRNA表達(dá)，兩者變化均以聯(lián)合組明顯;TSA0.5μmol/L干預(yù)可抑制Gli1 mRNA的表達(dá)，聯(lián)合CYA20μmol/L后對Hh通路的抑制效應(yīng)進(jìn)一步增強(qiáng)，降低Gli1、Smo mRNA表達(dá)量，上調(diào)Gli3 mRNA的表達(dá)。WesternBlot結(jié)果顯示，TSA0.5μmol/L、CYA20μmol/L單獨及聯(lián)合處理PANC-1后，凋亡相關(guān)蛋白Activated c

5、aspase-3，Activated caspase-8，Activated caspase-9的表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)，凋亡抑制因子Bcl-2的表達(dá)明顯下降，Hh信號關(guān)鍵分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表達(dá)均下降，以聯(lián)合組最為明顯;細(xì)胞免疫熒光(IF)結(jié)果同樣顯示Gli1表達(dá)明顯下降，與Western Blot結(jié)果相符。
　　結(jié)論:
　　1.TSA及CYA均可誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞凋亡，具有濃度依賴性;兩藥聯(lián)合可協(xié)同促進(jìn)P