14-3-3ε對胃癌細(xì)胞系SGC7901生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的:
　　研究14-3-3ε的表達(dá)水平對胃癌細(xì)胞SGC7901細(xì)胞增殖、周期及裸鼠皮下成瘤能力的影響及相關(guān)機制。
　　方法:
　?、俨捎冒邢蚋蓴_14-3-3ε的shRNA轉(zhuǎn)染SGC7901胃癌細(xì)胞，用嘌呤霉素進(jìn)行抗性篩選，挑選單克隆進(jìn)行增殖培養(yǎng)，用Western Blotting驗證14-3-3ε的表達(dá)，建立14-3-3ε穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞系（即轉(zhuǎn)染組）、對照組為轉(zhuǎn)染無干擾作用的shRNA的SGC7901胃癌細(xì)胞、未轉(zhuǎn)

2、染組為SGC7901胃癌細(xì)胞。
　?、谟肕TT法檢測各組細(xì)胞的增殖能力，用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期，檢測各組細(xì)胞處于細(xì)胞分裂周期中不同時期的細(xì)胞百分比。
　?、蹖⒓?xì)胞接種于Balb-c裸鼠前腋部皮下，根據(jù)瘤體體積的變化判斷各組細(xì)胞皮下成瘤能力。
　　④用Western Blotting檢測各實驗組細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclin E和p27kip1的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　?、俪晒?gòu)建14-3-3ε穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞

3、系。
　?、贛TT比色法轉(zhuǎn)染組吸光度值明顯低于未轉(zhuǎn)染組(P＜0.05);流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期分析轉(zhuǎn)染組處于G1/G0期的細(xì)胞百分比高于未轉(zhuǎn)染組(P＜0.05)，處于S期的細(xì)胞百分比低于未轉(zhuǎn)染組(P＜0.05);裸鼠皮下成瘤實驗轉(zhuǎn)染組瘤體體積增長明顯慢于未轉(zhuǎn)染組(P＜0.05)。
　　③WesternBlotting結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組cyclin E蛋白表達(dá)下調(diào)，顯著低于未轉(zhuǎn)染組(P＜0.05)，而p27kip1蛋白表達(dá)上調(diào)，顯著高

4、于未轉(zhuǎn)染組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　①成功建立了用shRNA進(jìn)行RNA干擾的14-3-3ε穩(wěn)定低表達(dá)的SGC7901胃癌細(xì)胞株;
　?、谕ㄟ^下調(diào)SGC7901胃癌細(xì)胞中14-3-3ε蛋白的表達(dá)使胃癌細(xì)胞增殖抑制、細(xì)胞周期G1/S期阻滯及裸鼠皮下成瘤能力降低，14-3-3ε可望成為胃癌診斷的指標(biāo)和靶向治療的靶點;
　　③下調(diào)SGC7901胃癌細(xì)胞14-3-3ε表達(dá)使cyclin E表達(dá)下調(diào)，p27kip1