胃癌細(xì)胞系SGC-7901腫瘤干細(xì)胞的初步研究.pdf

1、福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文胃癌細(xì)胞系SGC7901腫瘤干細(xì)胞的初步研究姓名：許揚(yáng)梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)（病理學(xué)）指導(dǎo)教師：鄭天榮鄭秋紅20080301胃癌細(xì)胞系SGC7901腫瘤干細(xì)胞的初步研究摘要目的：胃癌是我國(guó)癌癥中的頭號(hào)殺手，是對(duì)人類健康危害極大的惡性腫瘤。目前的研究顯示胃癌可能來(lái)源于干細(xì)胞。但胃癌干細(xì)胞的研究尚處于探索階段。本實(shí)驗(yàn)包含兩個(gè)方面的內(nèi)容：(1)證明胃癌細(xì)胞系SGC7901中存在腫瘤干細(xì)胞的等級(jí)結(jié)構(gòu)

2、。(2)建立一種培養(yǎng)胃癌干細(xì)胞的方法，并進(jìn)行干細(xì)胞特性鑒定。方法：(1)本實(shí)驗(yàn)通過(guò)有限稀釋法，分離單個(gè)細(xì)胞并觀查其增殖情況，以證明在胃癌細(xì)胞系SGC7901中存在腫瘤干細(xì)胞的等級(jí)結(jié)構(gòu)。(2)應(yīng)用添加有EGF、FGF和Insulin等生長(zhǎng)因子的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)SGC一7901細(xì)胞，得到懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞球。(3)利用有限稀釋法、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)、NOD／SCID鼠體內(nèi)異位移植成瘤實(shí)驗(yàn)、基因芯片技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)方法檢

3、測(cè)細(xì)胞球細(xì)胞的特性，并與貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞相比較。結(jié)果：(1)運(yùn)用有限稀釋法，發(fā)現(xiàn)有血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的單個(gè)SGC一7901細(xì)胞中，只有一小部分細(xì)胞能夠存活、增殖，并最終形成能夠穩(wěn)定傳代的細(xì)胞系；在無(wú)血清培養(yǎng)基中，也只有少量SGC7901細(xì)胞能夠懸浮生長(zhǎng)并增殖成細(xì)胞球，細(xì)胞球細(xì)胞可多次傳代，而且懸浮細(xì)胞的球形成能力大約是貼壁細(xì)胞的3倍。(2)軟瓊脂克隆形成能力實(shí)驗(yàn)中懸浮細(xì)胞組比貼壁細(xì)胞組形成更多更大的克隆集落。NOD／SCIDd、鼠成瘤實(shí)驗(yàn)顯示

4、，懸浮細(xì)胞在約86671155％的小鼠身上都能形成腫瘤，而貼壁細(xì)胞組成瘤率較低，只有13331155％左右。基因芯片結(jié)果顯示，腫瘤球細(xì)胞高表達(dá)與干細(xì)胞相關(guān)的基因ABCG2、HESl和KRTl53。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)這三個(gè)基因以及CD44的表達(dá)情況，其結(jié)果與基因芯片結(jié)果基本一致。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面ABCG2和CD44的表達(dá)情況，其結(jié)果同基因芯片和熒光定量PCR結(jié)果一致。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)不僅證明了胃癌細(xì)胞系SGC一7901中腫瘤