EBVBARF1基因真核表達載體的構建及其在胃癌細胞系SGC-7901中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討EBV-BARFl基因對胃上皮細胞增殖能力的影響，為進一步闡明EBV相關胃癌的發(fā)生機制奠定基礎。 方法： (1)根據(jù)GenBank提供的BARFl基因的cDNA序列，設計特異性引物擴增BARF1的ORF，克隆至pGEM-T載體，轉化大腸埃希菌DH5a，雙酶切鑒定篩選陽性克隆，進行序列測定。再將其插入真核表達載體pSG5中，轉化至表達宿主菌E coli DH5a，通過氨芐青霉素抗性篩選和雙酶切鑒定插入方向。

2、 (2)將重組表達質粒pSG5-BARFl及pSG5載體對照以脂質體法轉染胃癌細胞系SGC-7901，以RT-PCR法檢測目的基因BARF1的表達，細胞計數(shù)法檢測細胞增殖情況。 結果： (1)RT-PCR獲得696bp的BARF1基因，經(jīng)限制性酶切鑒定證實成功插入pGEM-T載體中，經(jīng)雙酶切鑒定和DNA序列測定證實成功構建真核表達載體pSG5-BARF1。 (2)轉染胃癌細胞系SGC-7901后通過RT-PCR

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