SELEX法體外篩選胃癌細(xì)胞SGC-7901適配子方法的建立.pdf

1、原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。學(xué)位論文中凡引用他人已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點(diǎn)等，均已明確注明出處。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究成果做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名： 查塞蘭 日 期： 鯊21 i ：!蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文S E L E X 法體外篩選

2、胃癌細(xì)胞S G C ．7 9 0 1 適配子方法的建立摘要目的：建立S E L E X 技術(shù)體外篩選胃癌細(xì)胞S G C ．7 9 0 1 適配子的方法，以獲得能與S G C ．7 9 0 1 細(xì)胞特異性結(jié)合的適配子。測(cè)定適配子與胃癌細(xì)胞的結(jié)合活性，以確定其親和性及特異性，為應(yīng)用于胃癌的臨床診斷和治療奠定基礎(chǔ)。方法：依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，體外合成兩端各為1 8 個(gè)堿基固定序列、中間為5 2 個(gè)堿基隨機(jī)序列、全長(zhǎng)8 8 個(gè)堿基的s s D N A

3、文庫(kù)，以胃癌細(xì)胞S G C ．7 9 0 1 為靶細(xì)胞、人胃粘膜細(xì)胞G E S ．1為反篩細(xì)胞，通過(guò)直接以活細(xì)胞做為篩選介質(zhì)，優(yōu)化P C R 擴(kuò)增技術(shù)，采用生物素．鏈親和素磁珠分離法制備s s D N A 次級(jí)文庫(kù)，建立了更加簡(jiǎn)便的S E L E X 技術(shù)，篩選出針對(duì)胃癌細(xì)胞S G C ．7 9 0 1 高親和力高特異性的適配子。利用地高辛．抗地高辛抗體．堿性磷酸酶系統(tǒng)測(cè)定每輪s s D N A 文庫(kù)與胃癌細(xì)胞的親和力。將最后一輪篩選產(chǎn)

4、物進(jìn)行克隆、測(cè)序并用相關(guān)軟件進(jìn)行適配子序列一級(jí)和二級(jí)結(jié)構(gòu)分析。進(jìn)一步檢測(cè)克隆適配子與胃癌細(xì)胞的親和性，選出一條親和性最高的適配子，分別與胃癌細(xì)胞S G C ．7 9 0 1 、人胃粘膜細(xì)胞G E S 一1 進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)，以確定其特異性。結(jié)果：1 ．不同的退火溫度和不同的循環(huán)次數(shù)將會(huì)產(chǎn)生不同的P C R 擴(kuò)增效率，通過(guò)P C R條件優(yōu)化，在退火溫度為4 5 。C 、1 5 個(gè)循環(huán)時(shí)擴(kuò)增d s D N A 產(chǎn)物最理想。2 ．經(jīng)過(guò)1 2 輪S