姜黃素誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞SGC-7901凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的:通過觀察姜黃素對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901生長(zhǎng)的影響、細(xì)胞周期改變及NF-κB、Livin、Caspase-3表達(dá)的變化，初步探討姜黃素誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞 SGC-7901凋亡的可能機(jī)制。
　　方法：（1）將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SGC-7901細(xì)胞，按每孔1000細(xì)胞加入到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種容積為100μl；37℃、5％CO2條件下預(yù)貼壁12h后,分別加入濃度為10、20、40、60、80、100μmol/L姜黃素溶液、DMSO溶劑

2、對(duì)照組及培養(yǎng)基空白對(duì)照組各100μl，每個(gè)濃度設(shè)置5個(gè)重復(fù)孔，分別培育12h、24h、36h、48h、72h后，用CCK-8法篩選最佳藥物濃度及作用時(shí)間；（2）設(shè)置空白對(duì)照組及20μmol/L，40μmol/L，60μmol/L姜黃素濃度組，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SGC-7901細(xì)胞，按每孔5000細(xì)胞加入到6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，待細(xì)胞數(shù)量達(dá)到106/孔后，分別加入2mL1640培養(yǎng)基、20、40、60μmol/L姜黃素溶液，培育24h，用流式細(xì)胞

3、儀測(cè)出各組細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡率；（3）選取空白對(duì)照組及20μmol/L，40μmol/L，60μmol/L姜黃素濃度組，提取各組細(xì)胞的蛋白，Western Blot檢測(cè)各組SGC-7901細(xì)胞中NF-κB、Livin及Caspase-3等與胃癌細(xì)胞內(nèi)抗凋亡與促凋亡蛋白表達(dá)量的變化。（4）本實(shí)驗(yàn)所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)并進(jìn)行分析，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組采用單因素配對(duì)樣本的t檢驗(yàn)，方差分析兩組及兩組以上數(shù)據(jù)結(jié)果。
　　結(jié)果：（1

4、）CCK-8檢測(cè)結(jié)果：姜黃素藥物濃度增加以及作用時(shí)間的延長(zhǎng)，SGC-7901細(xì)胞的增殖活力值逐漸下降，與對(duì)照組比較差異具有顯著性(P<0.05)。Pearson關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較 SGC-7901細(xì)胞對(duì)不同濃度姜黃素具有劑量的依賴性(r=0.901，P=0.00<0.01)以及時(shí)間的依賴性(r=0.389，P=0.00<0.01)。
　　（2）流式細(xì)胞儀檢測(cè)胃癌SGC-7901細(xì)胞的周期：姜黃素作用于SGC-7901

5、細(xì)胞的藥物濃度的增加以及時(shí)間的延長(zhǎng)，處于G1期的SGC-7901細(xì)胞數(shù)目明顯增加，且 S期的細(xì)胞數(shù)目均下降。FCM檢測(cè)20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L姜黃素溶液對(duì)SGC-7901凋亡率較對(duì)照組差異具有顯著性(P<0.05)。
　?。?）Western Blot免疫印跡分析蛋白表達(dá)，加入姜黃素藥物處理SGC-7901細(xì)胞，隨著姜黃素濃度的增高，SGC-7901細(xì)胞內(nèi)NF-κB蛋白同Livin蛋白表達(dá)水平逐漸降低，