姜黃素體外逆轉(zhuǎn)人胃癌細胞SGC7901-VCR多藥耐藥性.pdf

1、腫瘤細胞對一種抗腫瘤藥物出現(xiàn)耐藥的同時，對其他結(jié)構(gòu)不同、作用靶位不同的抗腫瘤藥物也產(chǎn)生抗藥性的現(xiàn)象稱為多藥耐藥(Multidrugresistance，MDR)。MDR降低了化療藥物在胃癌治療中的效果，成為胃癌治療中的一大障礙。為尋找有效逆轉(zhuǎn)MDR的藥物，中外學(xué)者進行了廣泛的研究。維拉帕米(verapamil，VRP)、環(huán)胞霉素A等化學(xué)致敏劑雖有逆轉(zhuǎn)MDR的功效，但因其毒副作用，使臨床應(yīng)用受到限制。目前國內(nèi)外學(xué)者積極尋找高效、低毒、作用

2、靶點廣泛的腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑，許多學(xué)者把目光轉(zhuǎn)向天然藥物。中藥資源豐富，作用靶點多，可針對多藥耐藥機制復(fù)雜的特點，現(xiàn)有研究亦提示開發(fā)中藥腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑有較好的前景。 目的：觀察植物提取物姜黃素在無細胞毒性作用濃度(低濃度)下，是否可逆轉(zhuǎn)多藥耐藥胃癌細胞SGC7901/VCR對長春新堿的耐藥性；如果能夠逆轉(zhuǎn)耐藥，是否與姜黃素對耐藥蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的表達和功能的影響有關(guān)。 方法：(1)

3、借助MTT、平板克隆形成和細胞周期分析確認多藥耐藥胃癌細胞SGC7901/VCR相對于其親本細胞SGC7901對化療藥的耐藥性。(2)將不同濃度的姜黃素作用于SGC7901/VCR和SGC7901細胞，通過MTT實驗，繪制細胞生存曲線，觀察姜黃素對兩種胃癌細胞生長的影響，篩選出對兩種胃癌細胞均無細胞毒性作用的安全劑量的姜黃素濃度范圍。 (3)將低劑量姜黃素與化療藥長春新堿聯(lián)合作用于耐藥細胞SGC7901/VCR，利用MTT實驗等

4、，觀察姜黃素能否逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR的耐藥性，提高該細胞對長春新堿的敏感度。(4)通過堿性磷酸酶免疫組織化學(xué)、熒光免疫組織化學(xué)、間接免疫熒光流式細胞儀檢測、RT-PCR和Westernblot實驗，檢測SGC7901和SGC7901/VCR細胞P-gp表達的差異；并觀察低劑量姜黃素處理SGC7901/VCR細胞，對多藥耐藥基因MDR1mRNA和P-gp表達的影響。(5)利用羅丹明123(Rh123)蓄積實驗，借助流式細胞儀觀察姜黃

5、素對SGC7901/VCR細胞膜表面P-gp泵功能的影響。 結(jié)果：(1)長春新堿對SGC7901細胞的生長抑制率明顯高于SGC7901/VCR細胞；長春新堿對SGC7901細胞的克隆形成率的抑制明顯強于SGC7901/VCR細胞；長春新堿可以使SGC7901細胞發(fā)生明顯的G2/M期阻滯，而對SGC7901/VCR各時相細胞的比例沒有明顯的影響。 (2)在濃度篩選實驗中發(fā)現(xiàn)，SGC7901/VCR細胞對姜黃素不產(chǎn)生耐藥性，

6、0-25μmol/L姜黃素對兩種胃癌細胞均無細胞毒性作用。(3)低劑量姜黃素(0-25μmol/L)與長春新堿聯(lián)合作用于耐藥細胞SGC7901/VCR，可以使細胞生存率和克隆形成率明顯降低，S期細胞(增殖期細胞)的比例明顯降低，G2/M期細胞的比例升高，出現(xiàn)G2/M期阻滯。(4)耐藥細胞SGC7901/VCR中多藥耐藥基因MDR1mRNA和膜表面P-gp的表達明顯高于其親本細胞SGC7901。用低劑量姜黃素處理SGC7901/VCR細胞

7、，多藥耐藥基因MDR1mRNA和P-gp的表達沒有明顯的變化。(5)Rh123蓄積實驗表明低劑量姜黃素可以直接抑制P-gp的泵功能。 結(jié)論：(1)胃腺癌細胞系SGC7901/VCR相對于其親本細胞系SGC7901，確實對傳統(tǒng)化療藥長春新堿產(chǎn)生明顯的耐藥性，SGC7901/VCR細胞可以認為是一株多藥耐藥細胞。(2)SGC7901/VCR細胞對姜黃素不具有耐受的現(xiàn)象。(3)低劑量姜黃素可以逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR的耐藥性，提高該