洛貝林逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞SGC7901-VCR多藥耐藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探討哌啶類生物堿洛貝林(Lobeline)能否逆轉(zhuǎn)人胃癌多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR的多藥耐藥,并進(jìn)一步探討洛貝林逆轉(zhuǎn)其多藥耐藥的機(jī)制,評(píng)估其有效性。
　　方法：
　　以人胃癌多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR為研究對(duì)象,用四氮唑藍(lán)(MTT)法分別測(cè)定多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR及在洛貝林無細(xì)胞毒濃度(10μM)作用下對(duì)VCR及5-Fu的半數(shù)生長(zhǎng)抑制率,并由此求其耐藥逆轉(zhuǎn)的倍數(shù);熒光免疫細(xì)

2、胞化學(xué)法分別檢測(cè)多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR及在洛貝林低劑量無毒濃度(5μM、10μM)作用下細(xì)胞表面P-gp的熒光表達(dá)情況;RT-PCR分別檢測(cè)多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR及在不同終濃度洛貝林(10μM、20μM、50μM、100μM)作用下多藥耐藥基因MDR1 mRNA的表達(dá)情況;Western-blot分別檢測(cè)多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR及在不同終濃度洛貝林(10μM、20μM、50μM、100μM)作用下

3、P-gp蛋白的表達(dá)情況。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.O軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　1.在洛貝林無毒作用濃度(10μM)作用下,多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR對(duì)化療藥的敏感性增加,VCR對(duì)耐藥細(xì)胞株的IC50由原來的16.55±0.13μg/L變成7.27±0.65μg/L,逆轉(zhuǎn)指數(shù)約為2.28;5-Fu對(duì)耐藥細(xì)胞株的IC50由原來的11.01±0.43μg/L變成9.53±0.79μg/L,逆轉(zhuǎn)指數(shù)約為1.16;<

4、br>　　2.熒光免疫細(xì)胞化學(xué)法提示在多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR表面有明顯的P-gp蛋白表達(dá),分別在洛貝林低劑量無毒濃度(5μM、10μM)作用下,P-gp蛋白的熒光表達(dá)隨洛貝林無毒劑量濃度增長(zhǎng)而減弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05);
　　3.RT-PCR檢測(cè)示多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR呈現(xiàn)MDR1 mRNA高度表達(dá),隨洛貝林終作用濃度的增大,MDR1 mRNA表達(dá)逐漸下降,各組間差距有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.0

5、5);
　　4.Western-blot檢測(cè)表明多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR高度表達(dá)P-gp蛋白,隨洛貝林作用終濃度依次增加P-gp蛋白表達(dá)依次減弱,組間呈濃度依賴性,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.無細(xì)胞毒作用濃度的洛貝林可以逆轉(zhuǎn)胃癌多藥耐藥細(xì)胞株 SGC7901/VCR的多藥耐藥,增強(qiáng)VCR和5-Fu的化療敏感性。
　　2.洛貝林對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)可能機(jī)