生長抑素類似物和胃癌細(xì)胞多藥耐藥逆轉(zhuǎn)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胃癌是消化道常見的惡性腫瘤，化療是治療胃癌的方法之一。然而，由于腫瘤的耐藥，影響了療效。腫瘤細(xì)胞接觸一種化療藥物并產(chǎn)生耐藥性，同時對其他多種結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的化療藥物也產(chǎn)生耐藥性，這種現(xiàn)象稱為多藥耐藥性(multiple drug resistance，MDR)。MDR是臨床腫瘤化療失敗的主要原因之一。ATP依賴性膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-gp被證實(shí)在胃癌細(xì)胞高表達(dá)，可能是胃癌耐藥的主要原因之一。 胃癌細(xì)胞對細(xì)胞毒藥物多藥耐藥的狀況，促進(jìn)

2、發(fā)展新的細(xì)胞毒藥物同時，非細(xì)胞毒藥物的研究也受到了極大的關(guān)注。大量的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，生長抑素類似物(somatostatin analogues，SSA)對非神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤具有抗增殖活性，SSA通過與細(xì)胞表面的生長抑素受體(somatostatinreceptor，SSTR)結(jié)合起作用。迄今有5種SSTR，octreotide對SSTR<,2>，SSTR<,2>和SSTR<,5>有高親和力。本研究應(yīng)用胃癌細(xì)胞系SGC-790l，檢測

3、SGC-790l細(xì)胞表面SSTR表達(dá)水平，從mRNA及蛋白質(zhì)水平檢測細(xì)胞毒藥物聯(lián)合應(yīng)用octreotide前后，SGC-790l細(xì)胞P-gp的表達(dá)水平的改變，探討octreotide增加細(xì)胞毒藥物化療敏感性與P-gp表達(dá)之間的關(guān)系。研究方法： 1．MTT比色法測定5-氟脲嘧啶，奧沙利鉑對SGC-790l細(xì)胞的生長抑制率，Bliss軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)。RT-PCR測定SGC-790l細(xì)胞MDR，SSTR<,2>

4、 mRNA的表達(dá)水平。 2SGC-790l細(xì)胞分為2組，對照組加入各種濃度的5-氟脲嘧啶，奧沙利鉑，實(shí)驗(yàn)組同時加入不同濃度的octreotide(O.05ug/ml，0.1ug/ml，0.2ug/ml，0.4ug/m1)， MTT比色法測定SGC-7901細(xì)胞的生長抑制率，Bliss軟件計(jì)算IC<,50>。分別用RT-PCR，流式細(xì)胞術(shù)測定octreotide作用前后MDR<,1>mRNA，P-gP的表達(dá)水平。研究結(jié)果：

5、 1．MTT測定應(yīng)用octreotide、細(xì)胞毒藥物及兩者聯(lián)合應(yīng)用對SGC-7901細(xì)胞的生長抑制率及IC<,50>。中高劑量組(0.1-0.4ug/ml)．octreotide聯(lián)合2種細(xì)胞毒藥物可以顯著降低各細(xì)胞毒藥物的IC<,50>(P<0.05)，而0.05ug/ml octreotide組作用不明顯(P>0.05)。亞細(xì)胞毒性濃度的octreotide(0.05ug/ml)與各細(xì)胞毒藥物聯(lián)合應(yīng)用，兩者具有協(xié)同細(xì)胞毒作用，各細(xì)胞

6、毒藥物不同的濃度水平上，聯(lián)合用藥指數(shù)均<1。各細(xì)胞毒藥物IC<,50>與octreotide濃度呈線性負(fù)相關(guān)(r=-0.949，-0.977 P<0.05)． 2．SGC-7901細(xì)胞表面有SSTR<,2>的表達(dá)。 3．在SGC-7901細(xì)胞培養(yǎng)24h后，加入不同濃度的octreotide作用24h，MDR<,1>mRNA均有不同程度的下降(P<0.05)，且octreot ide濃度越高，MDR<,1>mRNA擴(kuò)增量越

7、低，呈較好的劑量依賴關(guān)系。不同濃度的octreotide作用48h，與24h相比，MDR<,1>mRNA表達(dá)沒有顯著性改變(P>O.05)。 4．不同濃度的octreotide(0.05，0.1，0.2，0.4ug/ml)作用24 h，P-gp陽性率分別為12.58％，8.88％，4.21％，3.85％：與對照細(xì)胞相比，表現(xiàn)不同程度的降低(P<0.05)，隨octreotide濃度的增加，P-gp陽性率越低，有較好的劑量依賴性。

8、對照細(xì)胞P-gp陽性率為13.88％。 結(jié)論： 1．SGC-7901細(xì)胞P-gp過表達(dá)，細(xì)胞對2種細(xì)胞毒藥物耐藥。 2．SGC-7901細(xì)胞表面有SSTR<,2>的表達(dá)，octreotide可以通過與SSTR<,2>結(jié)合發(fā)揮抗增殖作用。 3．octreotide與細(xì)胞毒藥物聯(lián)合應(yīng)用可以降低各細(xì)胞毒藥物的 IC<,50>具有協(xié)同細(xì)胞毒效應(yīng)，各細(xì)胞毒藥物的IC<,50>降低程度與octreotide濃