RNA干擾逆轉(zhuǎn)人卵巢癌細胞多藥耐藥的實驗研究.pdf

1、研究目的：采用RNA干擾技術(shù)逆轉(zhuǎn)人卵巢癌OVCAR8/TR細胞中多藥耐藥基因，探討該技術(shù)能否有效地抑制多藥耐藥基因MDR1的表達，降低該基因編碼的糖蛋白P-gp的水平，以期恢復(fù)耐藥細胞對化療藥物的敏感性。 方法：設(shè)計合成針對MDR1的小片段RNA(siRNA)，將合成的siRNA用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染具有多藥耐藥基因MDR1高表達的人卵巢癌泰素耐藥細胞株OVCAR8/TR，用熒光定量RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后不同時間點的MDR1的mRNA的變

2、化，流式細胞儀定量測定轉(zhuǎn)染后不同時間點P-gp表達的情況，ATP生物發(fā)光法檢測轉(zhuǎn)染后細胞對順鉑、5-氟脲嘧啶、阿霉素和泰素四種化療藥物敏感性的變化。 結(jié)果：1.MDR1的siRNA轉(zhuǎn)染細胞24、48、72、96、120小時后，熒光定量RT-PCR檢測的MDR1的mRNA的量與未轉(zhuǎn)染細胞相比分別減少了26.42％、84％、78.43％、45.85％、0％，在轉(zhuǎn)染后的48小時基因的抑制達最高，以后則逐漸回升，在轉(zhuǎn)染的第五天回到正常水

3、平。陰性對照組mRNA的量與未轉(zhuǎn)染組的mRNA的量無差異。 2.轉(zhuǎn)染后的24、48、72、96、120小時，流式細胞儀定量測定的蛋白抑制率分別為16.71％、49.64％、85.23％、65.98％、9.44％，在轉(zhuǎn)染后的72小時其蛋白的抑制最強，至第五天時恢復(fù)接近正常水平，陰性對照組蛋白表達與未轉(zhuǎn)染組的蛋白表達無差異。 3.ATP生物發(fā)光法藥敏檢測顯示，OVCAR8/TR細胞對5-氟脲嘧啶敏感，而對順鉑、阿霉素和泰素均

4、不敏感，轉(zhuǎn)染后細胞能夠明顯提高對泰素和阿霉素的敏感性，而對順鉑的耐藥性則無改變。泰素對細胞的抑制率由轉(zhuǎn)染前的26％提高到78％，阿霉素對細胞的抑制率則由轉(zhuǎn)染前的37％提高到58％。單用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組的藥敏結(jié)果與未轉(zhuǎn)染組無統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論：本實驗結(jié)果顯示卵巢癌細胞中存在有RNA干擾現(xiàn)象，siRNA能夠有效地抑制多藥耐藥基因MDR1的mRNA和P-gp的表達，也能夠恢復(fù)通過P-gp轉(zhuǎn)運的化療藥物的敏感性。RNA干擾能夠逆轉(zhuǎn)人卵巢癌化