RNA干擾技術(shù)抑制卵巢癌耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤多藥耐藥性的研究.pdf

1、目的：探討載體表達(dá)的siRNA體內(nèi)抑制卵巢癌耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤MDR1基因及p-糖蛋白的表達(dá)，及逆轉(zhuǎn)耐藥卵巢癌組織多藥耐藥性的可行性。 方法：將濃度梯度誘導(dǎo)法建立的人卵巢癌阿霉素(ADM)耐藥細(xì)胞亞株OVCAR/AR注射入裸鼠皮下，建立卵巢癌耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤模型。隨機(jī)分為三組，待腫瘤直徑達(dá)0.5cm左右，局部瘤體注射法按0.5mg/kg體重分別導(dǎo)入針對MDR1基因的siRNA的質(zhì)粒表達(dá)載體pSN/mdrla、pSN/mdrlb

2、，次日給予化療藥物泰素20mg/kg尾靜脈注射單次用藥，轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒(pSN/e)的裸鼠模型組作對照。動(dòng)態(tài)觀測移植瘤生長情況及體積變化，計(jì)算腫瘤生長率。于化療后21天結(jié)束實(shí)驗(yàn)，取部分移植瘤組織作免疫組織化學(xué)染色檢測P-gp的表達(dá)，另將部分移植瘤組織制備成單個(gè)瘤細(xì)胞懸液，實(shí)時(shí)定量RT-PCR．測定MDR1 mRNA的表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測P-gp蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1皮下接種卵巢癌耐藥細(xì)胞OVCAR/AR后，30只裸鼠全部

3、成瘤，免疫組織化學(xué)染色顯示移植瘤細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)有。P-gp表達(dá)，轉(zhuǎn)染pSN/mdrla組和pSN/mdrlb組顯色程度低于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒(pSN/e)組，差異有顯著性(p<0.01)。 2轉(zhuǎn)染pSN/mdrla組和pSN/mdrlb組卵巢癌耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤平均生長率分別為164.5±15.8﹪和159.6±16.8﹪，明顯低于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒(pSN/e)組206.2±34.7﹪(p<0.01)；pSN/mdrla組和pSN/mdrlb

4、組之間相比，移植瘤生長率差異無顯著性(p>0.05)。 3轉(zhuǎn)染pSN/mdrla組和pSN/mdrlb組卵巢癌耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤模型MDR1 mRNA的表達(dá)水平分別為(3.320±0.659)×10<'8>和(3.152±0.589)×10<'8>拷貝/mL，明顯低于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒(pSN/e)組(4.317±0.774)×10<'8>拷貝/mL(p<0.05)；pSN/mdrla組和pSN/mdrlb組之間相比，MDRl mRNA

5、的表達(dá)差異無顯著性(p>0.05)。 4 轉(zhuǎn)染pSN/mdrla和pSN/mdrlb的兩組卵巢癌耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤模型P-gp的表達(dá)水平分別為49.06±8.66﹪和43.99±5.18﹪，明顯低于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒(pSN/e)的裸鼠模型組62.59+4.49﹪：pSN/mdrla組和pSN/mdrlb組之間相比，p-gp的表達(dá)差異無顯著性(p>0.05)。 結(jié)論：質(zhì)粒載體表達(dá)的MDR1特異性siRNA在卵巢癌耐藥細(xì)胞裸鼠