PARP-1抑制劑對(duì)卵巢癌耐藥細(xì)胞C13-生長(zhǎng)活性及耐藥性的影響.pdf

1、背景和目的
　　 卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)中病死率最高的惡性腫瘤，其發(fā)病率呈緩慢上升的趨勢(shì)[1]。絕大部分患者缺乏早期癥狀、就診時(shí)70％已為晚期，并伴有腹盆腔的廣泛轉(zhuǎn)移。晚期卵巢癌的主要治療方式為理想的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)加以鉑類為主的輔助化療[2]。然而順鉑作為最常用的一線化療藥物，對(duì)其產(chǎn)生原發(fā)或繼發(fā)耐藥性是卵巢癌治療的主要障礙，也是晚期卵巢癌患者五年生存率幾乎難以超過(guò)30％的主要原因之一[3]。
　　 目前關(guān)于卵巢癌的順鉑耐藥

2、機(jī)制的研究成為腫瘤治療的難點(diǎn)與熱點(diǎn)。順鉑是細(xì)胞周期非特性抗腫瘤藥物[4，5]，細(xì)胞毒作用主要是形成鉑-DNA加合物，從而破壞DNA的結(jié)構(gòu)和復(fù)制功能，導(dǎo)致DNA斷裂和編碼錯(cuò)誤[6]。DNA修復(fù)是細(xì)胞遺傳基礎(chǔ)穩(wěn)定性的關(guān)鍵，DNA修復(fù)能力增強(qiáng)是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥的主要原因[7,8]，并發(fā)現(xiàn)聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1[Poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1]在DNA損傷修復(fù)發(fā)揮重要作用。PARP-1是存在于哺乳動(dòng)

3、物中的翻譯后修飾酶，在保持染色體結(jié)構(gòu)完整、參與DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄、維持基因組穩(wěn)定和細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[9,10]。PARP-1在細(xì)胞中以非活性形式大量存在，輻射、化療藥物等導(dǎo)致DNA損傷后，DNA鏈的缺口或游離的DNA末端將其激活，PARP-1檢測(cè)到DNA斷鏈末端并與之結(jié)合后，將參與DNA損傷修復(fù)的蛋白迅速募集到損傷位點(diǎn)，一方面對(duì)DNA斷鏈予以修復(fù)，另一方面保護(hù)裸露的DNA末端免遭核酸酶的降解[11,12]。
　　 本研

4、究欲通過(guò)選用不同濃度新型高效PARP抑制劑PJ34處理卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株C13*，探討該藥物對(duì)C13*細(xì)胞生長(zhǎng)活性及對(duì)順鉑敏感性的影響，為PARP-1抑制劑的臨床應(yīng)用提供理論指導(dǎo)。
　　 方法
　　 1、應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)檢測(cè)PJ34對(duì)C13*細(xì)胞增殖活性及順鉑敏感性的影響;
　　 2、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PJ34對(duì)C13*細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響;
　　 3、免疫熒光技術(shù)及蛋白印跡法(West

5、ernblot)檢測(cè)PJ34處理前后PARP-1的表達(dá)及定位情況。
　　 結(jié)果
　　 1.PJ34對(duì)C13*細(xì)胞增殖及耐藥的影響MTT結(jié)果顯示當(dāng)順鉑濃度不變時(shí)，隨著PJ34濃度的增加，C13*細(xì)胞增殖抑制率明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，PJ34濃度固定時(shí)，隨著順鉑濃度的增加，C13*細(xì)胞增殖抑制率明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。
　　 2.PJ34對(duì)C13*細(xì)胞凋亡率及周期的影響細(xì)胞凋亡率隨PJ34濃度的增加而增高(P＜0

6、.05);周期為PJ34濃度越高，G0/G1期細(xì)胞越多，S期細(xì)胞越少。
　　 3.PJ34對(duì)C13*細(xì)胞內(nèi)PARP-1蛋白的表達(dá)及其定位的影響免疫熒光化學(xué)結(jié)果顯示PARP-1蛋白主要位于細(xì)胞核內(nèi)，少部分位于細(xì)胞漿中，當(dāng)PJ34作用細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)明顯減少。
　　 4.PARP-1蛋白的表達(dá)C13*細(xì)胞經(jīng)0，1，5μmmol/LPJ34及順鉑2.5μg/mL+PJ345μmmol/L處理24小時(shí)后，PARP-1蛋白表

7、達(dá)量分別為0.98±0.03，0.78士0.01，0.43士0.04和0.12+0.01，C13*細(xì)胞中PARP-1蛋白表達(dá)隨PJ34濃度增高而降低(P＜0.05)，當(dāng)順鉑與PJ34共同作用后C13*細(xì)胞中PARP-1蛋白表達(dá)降低更加明顯（P＜0.01）。
　　 結(jié)論
　　 1、PJ34可抑制C13*細(xì)胞增殖，能夠明顯增強(qiáng)順鉑對(duì)C13*細(xì)胞的化學(xué)毒性，提高其對(duì)順鉑的敏感性。
　　 2、PJ34能促進(jìn)C13*細(xì)胞凋