手霉素聯(lián)合順鉑對(duì)卵巢癌裸鼠移植瘤抑制作用的研究.pdf

1、目的：研究手霉素（Manumycin）聯(lián)合順鉑（DDP）對(duì)人卵巢癌細(xì)胞3AO的體外抑制作用及對(duì)裸鼠移植瘤的抑制作用，分析手霉素聯(lián)合順鉑抑制3AO細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)其凋亡的可能機(jī)制，探討手霉素聯(lián)合順鉑應(yīng)用于卵巢癌的可行性。
　　 方法：
　　 1、以不同濃度的手霉素作用于體外培養(yǎng)的人卵巢癌3AO細(xì)胞，用四甲基偶氮唑藍(lán)（tetrzolium-based colorimetric assay，MTT）比色試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性，并

2、觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。
　　 2、采用MTT比色法檢測(cè)手霉素聯(lián)合順鉑對(duì)3AO細(xì)胞增殖抑制的影響，采用金氏公式[1]分析相互作用指數(shù)（Iteraction Index），評(píng)價(jià)聯(lián)合后的作用，如q>0.85表示相加作用，q<0.85為拮抗作用。
　　 3、建立3AO細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型，待腫瘤生長(zhǎng)至接種后第2周，隨機(jī)分為4組，每組5只：分別為對(duì)照組、手霉素組、順鉑組、聯(lián)合用藥組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察裸鼠的飲食、活動(dòng)、反應(yīng)等情況。記

3、錄各組裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)情況，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率。
　　 4、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)移植瘤組織Survivin、NF-κB、VEGF、Caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　 5、流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測(cè)移植瘤組織細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、MTT比色法顯示手霉素（5、10、20、40、60μmol/L）對(duì)3AO細(xì)胞增殖具有抑制作用。不同

4、濃度手霉素處理細(xì)胞24～72h后，與對(duì)照組相比，各處理組OD值均有不同程度下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。而且隨手霉素濃度的增大、作用時(shí)間的延長(zhǎng)，OD值逐漸下降，即手霉素對(duì)3AO細(xì)胞的增殖抑制作用呈明顯的時(shí)間-劑量依賴(lài)效應(yīng)。光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)：未經(jīng)藥物作用的細(xì)胞呈梭形，形態(tài)飽滿(mǎn)，而用藥組細(xì)胞皺縮，破裂，呈不規(guī)則形，脫落細(xì)胞增多，抑制了3AO細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　 2、MTT比色法分析手霉素聯(lián)合順鉑對(duì)3AO細(xì)胞的增殖抑制作用，

5、結(jié)果顯示：10、20、40μmol/L的手霉素可增強(qiáng)順鉑對(duì)3AO細(xì)胞的增殖抑制作用，而且隨手霉素濃度的增大，其與順鉑的聯(lián)合作用增強(qiáng)。金氏公式分析相互作用指數(shù)表明不同濃度的順鉑聯(lián)合10、20、40μmol/L的手霉素的q值均>0.85。
　　 3、成功建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型，接種成功率為100％。治療結(jié)束后裸鼠移植瘤體積，各處理組小于對(duì)照組，聯(lián)合用藥組小于單藥組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。對(duì)照組、手霉素組、順鉑組、聯(lián)合

6、用藥組，抑瘤率分別為0.00％、29.85％、37.36％、64.60％。
　　 4、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)3AO細(xì)胞裸鼠移植瘤組織Survivin、VEGF、NF-Kb、Caspase-3蛋白的表達(dá)：對(duì)于每個(gè)指標(biāo)免疫組織化學(xué)評(píng)分，各處理組和對(duì)照組相比，聯(lián)合用藥組和單藥組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　 5、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：對(duì)照組、手霉素組、順鉑組、聯(lián)合用藥組，細(xì)胞凋亡率逐漸升高，分別為5.24±0.94

7、％、12.16±1.08％、17.41±2.26％、22.93±3.22％，細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞逐漸減少，G2/M期細(xì)胞逐漸增多，S期細(xì)胞變化不明顯。
　　 結(jié)論：
　　 1、手霉素對(duì)3AO細(xì)胞的增殖抑制作用呈時(shí)間-劑量依賴(lài)關(guān)系，手霉素與順鉑聯(lián)合應(yīng)用可增強(qiáng)順鉑對(duì)3AO細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　 2、手霉素可抑制3AO細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)，手霉素與順鉑聯(lián)合應(yīng)用抑瘤效果增強(qiáng)。
　　 3、手霉素可使3AO細(xì)