腫瘤多藥耐藥性逆轉(zhuǎn)的相關(guān)研究.pdf

1、腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的產(chǎn)生，目前已經(jīng)成為腫瘤化學(xué)治療失敗的主要原因。所謂多藥耐藥性是指腫瘤細(xì)胞在對(duì)一種抗腫瘤藥物出現(xiàn)耐藥的同時(shí)，對(duì)其他多種結(jié)構(gòu)各異、作用機(jī)制不同的抗腫瘤藥物同時(shí)產(chǎn)生交叉耐藥的現(xiàn)象。腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性現(xiàn)象是腫瘤治療中出現(xiàn)的最常見(jiàn)和最棘手的問(wèn)題，要提高惡性腫瘤化療的有效性，必須深入研究多藥耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制并尋求有效的逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性的對(duì)策。 MDRl(multidrugresistancegene1)基因的表達(dá)產(chǎn)物P-

2、糖蛋白(P-glycoprotein)是一個(gè)170kDa的糖蛋白，在多種多藥耐藥細(xì)胞株中高表達(dá)，是產(chǎn)生多藥耐藥性的主要原因。嘗試降低MDRl基因的表達(dá)，抑制P-糖蛋白的功能是目前逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性的主要策略。 利用RNA干擾技術(shù)來(lái)沉默MDRl基因的表達(dá)是逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性的有效方法之一。論文的第一部分采用核酸內(nèi)切酶制備針對(duì)MDRl基因的小干擾RNA(esiMDRl，endonuclease-preparedsiMDRl)，研究esiMD

3、Rl對(duì)MDRl基因表達(dá)沉默的作用。結(jié)果顯示，相對(duì)于未轉(zhuǎn)染的MCF-7／R(阿霉素耐受的MCF-7乳腺癌細(xì)胞)細(xì)胞，轉(zhuǎn)染esiMDRl的MCF-7／R細(xì)胞株中MDRl基因的mRNA減少了50％，羅丹明123滯留量增加了30％，對(duì)柔紅霉素的ICso值從4．5[xM減少到1.2μM。這些結(jié)果表明針對(duì)MDRl基因的esiRNA能夠有效下調(diào)內(nèi)源性P-糖蛋白的表達(dá)和功能。 MDRl基因的表達(dá)對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS水平的變化高度敏感，論文第二部分工作

4、研究了抗氧化劑(過(guò)氧化氫酶或N-乙酰半胱氨酸)對(duì)HepG2細(xì)胞中MDRl基因表達(dá)的影響。將過(guò)氧化氫酶(catalase)和N．乙酰半胱氨酸(NAC)加入到HepG2的細(xì)胞培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)，P-糖蛋白敏感的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)活性提高了(羅丹明123藥物的滯留)，MDRl基因的mRNA也有了明顯的上調(diào)(RT-PCR)，catalase處理48小時(shí)HepG2細(xì)胞中P-糖蛋白的蛋白表達(dá)量也有相應(yīng)地上調(diào)(Westernblotting)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，catala

5、se和NAC的加入導(dǎo)致細(xì)胞中ROS降低。而且JNK抑制劑SP600125能夠解除catalase對(duì)P-糖蛋白藥物轉(zhuǎn)運(yùn)活性的上調(diào)作用。這些數(shù)據(jù)表明catalase上調(diào)P-糖蛋白是通過(guò)降低了細(xì)胞內(nèi)的ROS而介導(dǎo)的，其中涉及到JNK的參與，而且這種現(xiàn)象在HepG2細(xì)胞中是比較特殊的。 有文獻(xiàn)報(bào)道P-糖蛋白的表達(dá)和功能受到多種細(xì)胞因子(TNFa，IL-1β，IL-6，IL-2，IFNγ等)和病理因素的調(diào)節(jié)，影響藥物的吸收和滯留。論文第三

6、部分的工作研究了TNFa對(duì)HepG2，Caco-2，MCF-7／R細(xì)胞中MDRl基因表達(dá)情況的影響，并檢測(cè)了TNFa與化療藥物阿霉素共同作用對(duì)細(xì)胞存活率的變化。結(jié)果顯示對(duì)于HepG2細(xì)胞，300U／ml的TNFa能微弱的下調(diào)MDRl基因的表達(dá)，而高劑量(30000U／ml)的TNFa能夠上調(diào)MDRl基因的表達(dá)；但用300U／mi的TNFa與阿霉素共同作用，并沒(méi)有改變細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性；在Caco-2細(xì)胞中，30000U／ml的TNF

7、a降低了50％的MDRl基因啟動(dòng)子的啟動(dòng)效率，而且在這個(gè)劑量下細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性有了明顯的增強(qiáng)；在MCF-7／R細(xì)胞中，300U／ml的TNFa雖然不能明顯的影響MDRl基因啟動(dòng)子的啟動(dòng)效率，但卻增強(qiáng)了細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性。這些結(jié)果證實(shí)了TNFa與化療藥物聯(lián)合使用對(duì)腫瘤細(xì)胞有一定的增敏作用，但是這種作用與MDR!基因表達(dá)變化的相關(guān)性在不同的細(xì)胞中存在著差異。 本論文采用了三種不同的途徑來(lái)逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性，即esiMDRl，抗氧化