胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑素受體第3亞型基因的異常.pdf

1、生長(zhǎng)抑素(somatostatin,SST)在胃腸道活動(dòng)的各種調(diào)控中起到關(guān)鍵性作用,由于它在大腦、垂體、胰腺、胃腸道、腎上腺、甲狀腺、腎和免疫系統(tǒng)等多種生理功能的調(diào)節(jié)作用而受到關(guān)注。其作用包括調(diào)控內(nèi)分泌和外分泌性分泌、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì),抑制胃腸蠕動(dòng)、營(yíng)養(yǎng)和離子的吸收,調(diào)節(jié)血管收縮。SS工具有抗腫瘤活性,調(diào)控正常和腫瘤細(xì)胞的增殖。
　　 SST與其受體結(jié)合而發(fā)揮作用,生長(zhǎng)抑素受體(somatostatin receptor,SSTR)

2、廣泛分布于正常組織器官和癌組織,許多人類腫瘤表達(dá)兩種以上SSTR亞型。多數(shù)表達(dá)SSTR的腫瘤細(xì)胞可以受到SST類似物的調(diào)節(jié)和限制,因此,SSTR在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)逐漸受到越來(lái)越多的關(guān)注。
　　 SSTR在細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程中起到了非常重要的抑制作用,具有強(qiáng)大的抗癌作用。前期的研究結(jié)果顯示,胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823不表達(dá)SSTR3mRNA,但其分子機(jī)制尚未闡明。本研究應(yīng)用PCR技術(shù)、PCR-PAGE-銀染技術(shù)和甲基化特

3、異性PCR技術(shù)觀察胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823 SSTR3基因外顯子的異常、SSTR3基因相關(guān)微衛(wèi)星位點(diǎn)(microsatellite locus,MSL,)的雜合性缺失(lossof heterozygosity,LOH)和SSTR3基因啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化,從遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)分析胃癌細(xì)胞SSTR3基因的異常,探討胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823SSTR3 mRNA不表達(dá)的分子機(jī)制。
　　 材料與方法

4、r>　　 1.基因組DNA提取常規(guī)酚-氯仿DNA提取法,分別提取10例正常人外周血、培養(yǎng)的胃癌細(xì)胞系SGC-7901和BGC-823基因組DNA。
　　 2.胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901 SSTR3基因外顯子檢測(cè)應(yīng)用PCR技術(shù)分別克隆胃癌細(xì)胞系BG-C-823和SGC-7901 SSTR3基因外顯子,序列分析,檢測(cè)其外顯子突變；DNAMAN軟件分析氨基酸序列異常。
　　 3.胃癌細(xì)胞系BGC-823細(xì)胞和

5、SGC-7901SSTR3基因相關(guān)MSL分析SSRhunter1.3軟件檢測(cè)出SSTR3基因上游的兩個(gè)MSL,分別命名為MSL1和MSL2。應(yīng)用PCR-PAGE-銀染技術(shù)觀察胃癌細(xì)胞系BGC-823細(xì)胞和SGC-7901SSTR3基因相關(guān)MSL異常。
　　 4.胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901 SSTR3基因啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化分析應(yīng)用甲基化特異性PCR-序列分析技術(shù),檢測(cè)胃癌細(xì)胞系SGC-7901和BGC-823SS

6、TR3基因啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化。
　　 結(jié)果：
　　 1.胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901 SSTR3基因外顯子檢測(cè)SSTR3基因外顯子的擴(kuò)增產(chǎn)物為1431bp；序列分析顯示,胃癌細(xì)胞系SGC-7901和BGC-823SSTR3基因外顯子均存在點(diǎn)突變；DNAMAN軟件分析其為同義突變,不影響SSTR3基因的表達(dá)。
　　 2.胃癌細(xì)胞系BGC-823細(xì)胞和SGC-7901 SSTR3基因相關(guān)MSL分析MS

7、L1擴(kuò)增產(chǎn)物為243bp,MSL2擴(kuò)增產(chǎn)物為234bp；PAGE-銀染檢測(cè)顯示,MSL1在胃癌細(xì)胞系SGC-7901和BGC-823均出現(xiàn)LOH,MSL2無(wú)多態(tài)性。
　　 3.胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901 SSTR3基因啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化分析PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為170bp；序列分析顯示,胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901SSTR3啟動(dòng)子區(qū)域均出現(xiàn)CpG島甲基化。
　　 結(jié)論：
　　 1.胃癌細(xì)