塞來昔布對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC7901-VCR多藥耐藥基因LRP、GCS表達(dá)影響的研究.pdf

1、研究背景:化學(xué)治療(Chemotherapy)是胃癌綜合治療的重要手段之一,但腫瘤細(xì)胞多藥耐藥(Multidrug Resistance,MDR)限制了化療藥物的作用發(fā)揮。研究MDR的發(fā)生及影響機(jī)制,對(duì)指導(dǎo)臨床合理化選擇化療藥物有重要的意義。MDR的產(chǎn)生機(jī)制較為復(fù)雜,其中耐藥基因的激活與表達(dá)增加,被認(rèn)為是MDR的重要因素。肺耐藥蛋白(lung resistance protein,LRP)與葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶(glucosyl cer

2、amide synthase,GCS)是二種常見的多藥耐藥基因,在胃癌細(xì)胞株中均有較高表達(dá),被認(rèn)為是引起胃癌多藥耐藥的重要基因。有研究表明,環(huán)氧合酶2(cycloo xygenase2,COX-2)與LRP、GCS在胃癌組織中均有較高表達(dá),并且COX-2與LRP、GCS在胃癌中的表達(dá)呈正相關(guān)性,而選擇性COX-2抑制劑(cyclo oxygenase2 inhibitors,COXIBs)可以增加腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性,其機(jī)制目前尚不清

3、楚,可能與下調(diào)LRP、GCS等耐藥基因的表達(dá)有關(guān)。本研究就是基于這一出發(fā)點(diǎn)而設(shè)計(jì)。
　　目的:用選擇性COX-2抑制劑塞來昔布(Celecoxib)干預(yù)胃癌細(xì)胞株生長,觀察其對(duì)胃癌細(xì)胞株LRP、GCS二種耐藥基因表達(dá)的影響,探討COX-2參與胃癌多藥耐藥的機(jī)制,為臨床使用COX-2抑制劑逆轉(zhuǎn)胃癌耐藥提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
　　方法:用選擇性COX-2抑制劑塞來昔布干預(yù)胃癌細(xì)胞株(SGC7901/VCR)培養(yǎng),同時(shí)不加任何干預(yù)措施

4、培養(yǎng)SGC7901/VCR細(xì)胞株作為對(duì)照,采用MTT法檢測不同劑量塞來昔布在不同的時(shí)間點(diǎn)對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC7901/VCR生長的影響;采用免疫組化及ELISA方法檢測塞來昔布在一定劑量范圍內(nèi)某一時(shí)間點(diǎn)對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞的GCS、LRP耐藥基因表達(dá)的含量,并用方差分析及t檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析,研究塞來昔布對(duì)胃癌細(xì)胞株耐藥基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:1)塞來昔布對(duì)SGC7901/VCR人胃癌細(xì)胞增殖的影響用MTT法分別在

5、24、48、72h測定不同濃度塞來昔布處理的胃癌細(xì)胞,12.5μmol/L塞來昔布處理后細(xì)胞的存活率分別是98.7％、94.3%、91.2%,25μmol/L塞來昔布的存活率分別是93.6%、86.4%、71.7%,50μmol/L塞來昔布的存活率分別是88.5%、79.8%、58.3%,100μmol/L塞來昔布的存活率分別是75.7%、53.2%、35.4%;200μmol/L塞來昔布的存活率分別是42.3%、35.1%、17.2%

6、。提示塞來昔布呈時(shí)間、劑量依賴性抑制胃癌細(xì)胞株SGC7901/VCR的生長,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
　　2)ELISA結(jié)果:在正常胃癌細(xì)胞株中SGC7901/VCR中LRP、GCS兩種耐藥基因均有表達(dá),其蛋白含量分別為87.84±5.85ng/ml、12.16±0.92ng/ml。經(jīng)不同劑量的塞來昔布處理胃癌細(xì)胞株,與對(duì)照組相比:LRP在四種不同劑量(VLD、LD、MD、HD)組的含量均較對(duì)照組有明顯下降(分別為71.50±5.90ng/

7、ml,t=18.891,P<0.01;53.54±3.79ng/ml,t=8.973,P<0.01;38.90±4.20ng/ml,t=5.710,P<0.01;17.48±3.92ng/ml,t=4.234,P<0.01),VLD組與LD、MD、HD組含量的差別也同樣具有顯著性。(分別t=14.246,P<0.01;t=12.899,P<0.01;t=6.759,P<0.01)。LD組與MD、HD組含量的差別也同樣具有顯著性。(分別t

8、=12.899,P<0.01;t=6.759,P<0.01)。MD組與HD組含量的差別也同樣具有顯著性(t=11.240,P<0.01)。GCS在VLD、LD、MD、HD三組的含量也均較對(duì)照組有下降(分別為9.22±0.53g/ml,t=17.148,P<0.01;7.86±0.55ng/ml,t=12.861,P<0.01;6.24±0.45ng/ml,t=8.945,P<0.01,3.27±0.33ng/ml,t=5.968,P<0

9、.01)VLD與LD組、MD組及HD的含量相比有明顯差別(t=19.601,P<0.01;t=11.940,P<0.01;t=7.039,P<0.01),LD組與MD、HD組含量的差別也同樣具有顯著性。(分別t=19.039,P<0.01;t=8.945,P<0.01)。MD組與HD組含量的差別也同樣具有顯著性(t=12.651,P<0.01)。
　　3)細(xì)胞免疫組化結(jié)果:以Image-ProPlus圖像分析軟件分析塞來昔布處理后

10、的細(xì)胞與空白對(duì)照組細(xì)胞LRP免疫組化吸光度。在同一時(shí)間的不同濃度之間的OD值采用單因素方差分析:24小時(shí)方差F=182.83,P<0.01,兩兩比較:對(duì)照組、VLD組與其它各組間P<0.01,LD組與MD組間P=0.03,MD組與HD組間的P<0.05,48小時(shí)方差F=233.46P<0.01,兩兩比較:對(duì)照組、VLD組與其它各組間P<<0.01,LD組與MD組間P=0.02,MD組與LD組間的P=0.04。在同一濃度的24h與48h的

11、OD值差異則采用t檢驗(yàn),VLD組:t=18.26,P<0.01;LD組:t=20.09,P<0.01;MD組:t=9.43,P<0.01;HD組:t=6.19,P<0.01。同樣,以Image-ProPlus圖像分析軟件分析各組GCS吸光度。在同一時(shí)間點(diǎn)的不同濃度之間的OD值采用單因素方差分析示:24小時(shí)方差F=90.57,P<0.01,兩兩比較:對(duì)照組、VLD組與其它各組間P<0.01,LD組與MD組間P=0.03,MD組與LD組間的

12、P<0.05,48小時(shí)方差F=470.89,P<0.01,兩兩比較:對(duì)照組、VLD組與其它各組間P<0.01,LD組與MD組間P=0.02,MD組與LD組間的P<0.05。在同一濃度的24h與48h的OD值則采用t檢驗(yàn),VLD組:t=15.22,P<0.01;LD組:t=20.09,P<0.01。MD組:t=17.13,P<0.01;HD組:t=10.65,P<0.01。
　　結(jié)論:1:選擇性COX-2抑制劑塞來昔布可以抑制胃癌細(xì)