胃癌SGC7901-ADR細胞株β-catenin表達下調(diào)細胞株的建立及與多藥耐藥性的研究.pdf

1、研究背景：
　　胃癌作為較常見的惡性腫瘤，早期一般無明顯的臨床癥狀，一經(jīng)確診，多數(shù)已屬于II、III期，化療在進展期胃癌的綜合治療中有著重要地位。雖然目前在化療藥物和化療方案方面取得了極大地進步，但是多數(shù)患者預后不理想，主要是因為腫瘤細胞多藥耐藥性（multidrug resistance，MDR）的產(chǎn)生，導致了很多胃癌患者的化療失敗。所以，探尋胃癌產(chǎn)生多藥耐藥的原因以及具體機制，以尋求高效、低毒的逆轉(zhuǎn)劑，已經(jīng)成為目前在胃癌研究領(lǐng)

2、域的重中之重。
　　此前，本實驗室建立了S100A6低表達的7901穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)S100A6低表達可在一定程度上降低胃癌細胞的耐藥性，而且S100A6表達下調(diào)的同時β-catenin也呈現(xiàn)一定程度的低表達，認為S100A6與β-catenin可能是正相關(guān)關(guān)系。在此基礎上為了探尋β-catenin與胃癌MDR的關(guān)系，本研究擬構(gòu)建β-catenin低表達的SGC7901/ADR細胞株，觀察β-catenin下調(diào)是否能夠在一定

3、程度上逆轉(zhuǎn)胃癌的多藥耐藥性，以探討β-catenin與胃癌多藥耐藥的關(guān)系。目的：本實驗通過RNA干擾轉(zhuǎn)染技術(shù)下調(diào)SGC7901/ADR耐藥細胞株β-catenin的表達，觀察β-catenin下調(diào)后 SGC7901/ADR多藥耐藥性變化，以探討β-catenin與胃癌多藥耐藥的關(guān)系。
　　方法：
　　培養(yǎng)阿霉素耐藥細胞株SGC7901/ADR，應用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到SGC7901/ADR細胞中。將SGC790

4、1細胞、SGC7901/ADR細胞、shRNA-CTNNB1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞和shRNA-NC質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞進行培養(yǎng)，每種細胞提取其總蛋白和總RNA，進行Western blotting實驗以及RT-PCR實驗，在蛋白水平和RNA水平分別來分析β-catenin在這四種細胞中的差異表達。將這四種細胞分別接種在96孔板上進行CCK8實驗，在450nm處依次測定每一孔細胞的OD值，根據(jù)OD值，運用寇氏改良法公式可以計算出這四種細胞的IC50（藥物

5、半抑制濃度）和RI（耐藥指數(shù)）。
　　結(jié)果：
　　1.成功轉(zhuǎn)染耐阿霉素細胞株SGC7901/ADR，得到了β-catenin表達下調(diào)的shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞株和陰性對照 shRNA-NC轉(zhuǎn)染細胞株。2.Western blotting結(jié)果：β-catenin蛋白在7901細胞、耐阿霉素的SGC7901/ADR細胞、β-catenin表達下調(diào)的shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞、陰性對照的shRNA-NC轉(zhuǎn)染細胞平均表

6、達量為0.434±0.244、1.372±0.264、0.661±0.083、1.436±0.178。兩個獨立樣本的t檢驗做四種細胞的兩兩比較，SGC7901/ADR細胞與SGC7901細胞、shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞比較，P<0.05，差異性顯著；SGC7901/ADR細胞與shRNA-NC轉(zhuǎn)染細胞比較，P>0.05，差異性不顯著；SGC7901細胞與shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞比較，P>0.05，差異性不顯著。3.RT-P

7、CR結(jié)果：β-catenin基因mRNA在7901細胞、耐阿霉素的SGC7901/ADR細胞、β-catenin表達下調(diào)的shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞、陰性對照的shRNA-NC轉(zhuǎn)染細胞中的平均表達量為0.659±0.05、1.106±0.043、0.747±0.027、1.111±0.043。兩個獨立樣本的t檢驗做四種細胞的兩兩比較，SGC7901/ADR細胞與SGC7901細胞、shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞比較，P<0.05

8、，差異性顯著；SGC7901/ADR細胞與shRNA-NC轉(zhuǎn)染細胞比較，P>0.05，差異性不顯著；SGC7901細胞與shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞比較，P>0.05，差異性不顯著。4.CCK8實驗結(jié)果：阿霉素作用下7901細胞、耐阿霉素的SGC7901/ADR細胞、β-catenin表達下調(diào)的shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞、陰性對照的shRNA-NC轉(zhuǎn)染細胞的IC50分別為0.378±0.026ug/ml、1.371±0.044

9、ug/ml、0.497±0.017ug/ml、1.414±0.079ug/ml。兩個獨立樣本的t檢驗做四種細胞的兩兩比較，SGC7901/ADR細胞與SGC7901細胞、shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞比較，P<0.05，差異性顯著；SGC7901/ADR細胞與shRNA-NC轉(zhuǎn)染細胞比較，P>0.05，差異性不顯著；SGC7901細胞與shRNA-CTNNB1轉(zhuǎn)染細胞比較，P<0.05，差異性顯著。
　　結(jié)論：
　　1.重