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1、目的:檢測(cè)乏氧情況下骨肉瘤細(xì)胞株Saos2對(duì)ADM和DDP的敏感性改變,分析其與多藥耐藥相關(guān)基因MDR1、GST-π、LRP(肺耐藥蛋白)和MRP(多藥耐藥相關(guān)蛋白)表達(dá)的關(guān)系,同時(shí)檢測(cè)其細(xì)胞周期的改變,探討骨肉瘤化療耐藥的機(jī)理,為臨床上預(yù)測(cè)腫瘤耐藥程度、判斷療效和合理選擇化療方案提供依據(jù)和指導(dǎo)。 方法:乏氧條件下(0.2%O2)人骨肉瘤細(xì)胞株Saos2體外培養(yǎng)24小時(shí),75%酒精固定后應(yīng)用MTT法測(cè)定細(xì)胞株化療藥物敏感性;應(yīng)用
2、熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)檢測(cè)MDR1mRNA和GST-πmRNA表達(dá)水平;MDR1、GST-π、LRP和MRP蛋白水平的表達(dá)及細(xì)胞周期的改變采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)進(jìn)行。 結(jié)果:乏氧后Saos2細(xì)胞對(duì)阿霉素(ADM)、順鉑(DDP)的敏感性均低于常氧對(duì)照,耐藥相關(guān)基因的表達(dá)高于常氧對(duì)照,其GST-π表達(dá)較常氧對(duì)照增加15%。細(xì)胞株經(jīng)1/5半數(shù)抑制濃度(IC50)的ADM和DDP處理后,乏氧組和常氧組耐藥相關(guān)基因
3、表達(dá)均有所上調(diào),其中GST-π增幅達(dá)30%~40%。 FCM檢測(cè)腫瘤組織P-gp、LRP、MRP的表達(dá)處于較低水平,GST-π表達(dá)處于較高水平。X2分析顯示,P-gp表達(dá)水平與ADM的耐藥有關(guān)(X2=9.554,P=0.008),GST-π表達(dá)水平與ADM、DDP的耐藥有關(guān)(X2分別為6.051、8.015,P值分別為0.049、0.013)。 患者耐藥基因GST-π表達(dá)在mRNA水平較乏氧前明顯升高,而MDR1無(wú)明顯改
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