水飛薊素對(duì)人骨肉瘤Saos-2細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究水飛薊素（silymarin，SM）對(duì)人骨肉瘤Saos-2細(xì)胞增殖及凋亡的影響,并進(jìn)一步探討與基因P21、Caspase-3、Bax及Bcl-2對(duì)其有無(wú)調(diào)控作用。
　　方法：
　?。?）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人骨肉瘤Saos-2細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組及不同藥物濃度梯度組，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
　?。?）CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖。
　?。?）Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)

2、胞凋亡。
　?。?）RT-PCR檢測(cè)增殖抑制基因 P21及凋亡相關(guān)基因 Caspase-3、Bax、Bcl-2mRNA表達(dá)水平。
　?。?）WesternBlot檢測(cè)P21、Caspase-3蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：
　?。?）對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)良好，不同藥物濃度組細(xì)胞變小、變圓，呈凋亡樣改變，濃度越高，上述細(xì)胞形態(tài)改變?cè)矫黠@。
　　（2）CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示，不同藥物濃度組細(xì)胞增殖受抑制，呈時(shí)間及劑量依賴性。

3、　?。?）Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，不同藥物濃度組細(xì)胞凋亡數(shù)量增多，呈劑量依賴性。
　?。?）RT-PCR檢測(cè)結(jié)果分析顯示，與對(duì)照組相比，不同藥物濃度組增殖抑制基因P21及促凋亡基因Caspase-3、BaxmRNA表達(dá)量均明顯增加（P＜0.05）,而抗凋亡基因Bcl-2mRNA表達(dá)量明顯下降（P＜0.05）。
　　（5）Western Blot檢測(cè)結(jié)果分析顯示，與對(duì)照組相比，不同藥