多藥耐藥蛋白MRP4在耐ADM骨肉瘤細(xì)胞中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：闡明阿霉素（doxorubicin，ADM）對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系MG63，骨肉瘤耐藥細(xì)胞系MG63/DOX,以及原代培養(yǎng)骨肉瘤耐藥細(xì)胞系GSF-0686細(xì)胞體外增殖抑制作用和多藥耐藥蛋白MRP4在細(xì)胞耐藥中的作用。
　　方法：
　　1）CCK-8法檢測ADM對(duì)MG63，MG63/DOX，GSF-0686細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　2）5μmol ADM分別作用于MG63，MG63/DOX，SF-0686三株細(xì)胞后，使用液

2、相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定不同時(shí)間點(diǎn)三種細(xì)胞內(nèi)外的ADM藥物濃度。
　　3）Western Blotting法與qPCR法檢測、比較三種細(xì)胞株的MRP4的表達(dá)。
　　4）加ADM刺激MG63和MG63/DOX細(xì)胞后，采用qPCR法分別檢測兩種細(xì)胞隨加藥時(shí)間和藥物濃度變化時(shí)腫瘤耐藥相關(guān)蛋白MRP4基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1）ADM對(duì)MG63，MG63/DOX，GSF-0686的增殖均有抑制作用，但其對(duì)MG63/D

3、OX和GSF-0686細(xì)胞的增殖抑制作用明顯弱于MG63，有顯著性差異（P＜0.05）。
　　2）MG63/DOX和SF-0686細(xì)胞內(nèi)ADM濃度明顯低于MG63細(xì)胞內(nèi)濃度，同時(shí)MG63/DOX和SF-0686細(xì)胞外ADM濃度明顯高于MG63細(xì)胞外濃度。
　　3）耐藥細(xì)胞株MG63/DOX和SF-0686中MRP4的mRNA與蛋白表達(dá)量均高于親本株MG63。
　　4）ADM可下調(diào)MG63/DOX和MG63細(xì)胞MRP4的