LEF-1在骨肉瘤組織中的表達及其對骨肉瘤細胞增殖和轉移影響的研究.pdf

1、背景:
　　骨肉瘤是一種侵襲力強、血行轉移發(fā)生早且肺轉移發(fā)生率高的骨原發(fā)性惡性腫瘤,常好發(fā)于兒童和青少年。40％左右的病例出現遠隔臟器轉移(主要是肺轉移)而死亡,骨肉瘤的肺轉移是影響患者生存的最重要原因。目前,對骨肉瘤轉移的分子機制尚不清楚。本實驗室長期致力于骨肉瘤轉移機制的研究,建立了兩株來自同一母系但具有不同轉移能力的骨肉瘤細胞株:F4細胞株和F5M2細胞株,其中F4細胞具有低增殖轉移能力,F5M2細胞株具有高增殖轉移能力。同

2、時利用全基因組芯片技術對其表達譜進行分析,發(fā)現了若干差異表達的基因,淋巴樣增強因子-1(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)就是其中的一個,提示其可能參與骨肉瘤的轉移。
　　Wnt信號途徑是廣泛存在于多細胞真核生物中的一條在進化上高度保守的、對控制胚胎發(fā)育和腫瘤的發(fā)生與轉移有重要作用的信號傳導通路。其異常表達或激活會導致多種疾病的發(fā)生。LEF-1作為淋巴增強因子/T細胞因子(LEF/TCF)家族成員之

3、一,是Wnt信號通路重要的核內信號分子,其主要通過募集轉錄激活因子β-catenin到Wnt靶基因,從而介導信號通路導致疾病發(fā)生。
　　目的:
　　探討LEF-1在骨肉瘤組織中的表達及其臨床意義;驗證LEF-1在不同轉移能力骨肉瘤細胞株(F4,F5M2)中的差異表達;初步研究LEF-1對骨肉瘤細胞增殖和轉移能力的影響,為LEF-1在骨肉瘤的早期診斷﹑靶向治療及預后預測等方面的臨床應用提供理論基礎。
　　方法:
　

4、　1.應用免疫組織化學染色法(SP法)檢測68例原發(fā)性骨肉瘤組織和26例骨軟骨瘤組織中LEF-1蛋白的表達差異情況,并應用統(tǒng)計學方法分析其與骨肉瘤各項臨床病理指標之間的相關性。
　　2.采用Western-blot及quantitative RT-PCR的方法,對利用全基因組芯片篩選出來的在不同轉移能力的骨肉瘤細胞株(F4,F5M2)中差異表達的LEF-1基因進行驗證。
　　3.用RNAi干涉技術將LEF-1siRNA轉染到

5、F5M2細胞中,使用Western-blot和quantitative RT-PCR的方法檢測轉染LEF-1 siRNA后細胞中LEF-1的表達變化。
　　4.MTT法檢測干涉LEF-1的表達對骨肉瘤F5M2細胞增殖的影響。
　　5.Transwell實驗檢測干涉LEF-1的表達對骨肉瘤F5M2細胞侵襲和遷移的影響。
　　結果:
　　1.LEF-1在骨肉瘤組織和骨軟骨瘤組織中的陽性表達率分別為91.2%(62/6

6、8)和11.5(3/26)。LEF-1的陽性表達率在骨肉瘤組織中明顯高于骨軟骨瘤組織,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。LEF-1在骨肉瘤組織中的表達與骨肉瘤的肺轉移呈正相關關系。
　　2.分別采用Western-blot和quantitative RT-PCR檢測LEF-1在F4、F5M2細胞中的表達水平,結果顯示LEF-1在F4、F5M2細胞中差異表達,在F5M2細胞中的表達較高。
　　3.成功利用RNAi干涉技術將LE

7、F-1siRNA轉染到骨肉瘤細胞株F5M2中,Western-blot和quantitative RT-PCR檢測轉染效果,結果顯示LEF-1在骨肉瘤細胞株F5M2中的表達下調。
　　4.MTT實驗結果顯示,LEF-1siRNA實驗組F5M2細胞的增殖能力與陰性對照組和空白對照組相比顯著降低。Transwell實驗結果顯示,LEF-1siRNA實驗組F5M2細胞的侵襲和遷移能力與陰性對照組和空白對照組相比顯著降低。
　　結論