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文檔簡(jiǎn)介
1、【背景與目的】:
F-box家族蛋白是細(xì)胞Skp-Cullin-F-box(SCF)復(fù)合體重要的成分,通過(guò)識(shí)別特異蛋白底物并經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑降解該關(guān)鍵蛋白,參與細(xì)胞周期和免疫應(yīng)答等細(xì)胞生物行為的調(diào)節(jié)。FBXO39是F-box家族一員,已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中異常表達(dá),提示可能參與腫瘤形成與進(jìn)展,但其與骨肉瘤的關(guān)系未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。本研究探討FBXO39基因?qū)w外骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
【方法】:
首
2、先采用qRT-PCR檢測(cè)FBXO39在骨肉瘤HOS、U-2OS及Saos-2三個(gè)細(xì)胞株中的表達(dá)水平,選取具有最高表達(dá)量的U-2OS細(xì)胞株進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。然后使用含有目的基因RNA干擾序列的慢病毒進(jìn)行U-2OS細(xì)胞感染,同時(shí)設(shè)置感染陰性對(duì)照病毒的目的細(xì)胞作為對(duì)照組。感染后采用熒光顯微鏡檢測(cè)感染效率, qRT-PCR和 Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞 FBXO39的表達(dá)量。最后,采用 Celigo細(xì)胞成像分析和MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩組細(xì)胞的增
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