沉默DDX49基因?qū)侨饬黾?xì)胞增殖的影響_3064.pdf

1、背景：
　　骨肉瘤是最常見的骨原發(fā)性惡性腫瘤，其惡性程度高，容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。與其它的骨腫瘤相比，骨肉瘤患者的預(yù)后較差。然而，骨肉瘤患者的生存率在過去30年里沒有得到明顯的提高。很多學(xué)者認(rèn)為通過研究骨肉瘤的生物學(xué)特性將有助于找到治療骨肉瘤的有效方法。DEAD-box RNA解旋酶不僅參與幾乎所有與RNA代謝有關(guān)的過程，還參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄和翻譯，并且與細(xì)胞增殖及腫瘤轉(zhuǎn)化有關(guān)。DDX49是DEAD-box RNA解旋酶家族中的一個成員，目

2、前尚無具體闡述DDX49在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)功能的研究報道。
　　目的：
　　本研究旨在研究DDX49基因在骨肉瘤細(xì)胞增殖及凋亡中的作用，為骨肉瘤的診斷和治療提供新的分子靶點。
　　方法：
　　用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測DDX49基因在四種骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)，用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)沉默

3、DDX49在U-2OS細(xì)胞中的表達(dá)，然后用qRT-PCR檢測DDX49基因的敲減效率，用Celigo細(xì)胞掃描分析儀動態(tài)觀察細(xì)胞增殖情況及細(xì)胞個數(shù)的變化，用噻唑蘭（methylthiazoletetrazolium，MTT）實驗檢測細(xì)胞活力，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：
　　qRT-PCR結(jié)果DDX49基因在四種骨肉瘤細(xì)胞中有表達(dá)；經(jīng)RNA干擾慢病毒感染U-2OS細(xì)胞3天后，qRT-PCR結(jié)果顯示RNA干擾慢病毒能有

4、效抑制U-2OS細(xì)胞中DDX49基因在mRNA水平的表達(dá)；經(jīng)慢病毒感染U-2OS細(xì)胞后用Celigo細(xì)胞掃描分析儀連續(xù)檢測5天，結(jié)果顯示，抑制DDX49基因的表達(dá)能顯著抑制U-2OS細(xì)胞的增殖；經(jīng)慢病毒感染U-2OS細(xì)胞3天后，MTT實驗連續(xù)檢測5天，結(jié)果顯示，與DDX49基因非沉默組相比，沉默組在波長490nm處的吸光率隨時間增加逐漸降低，表明抑制DDX49基因的表達(dá)能明顯降低U-2OS細(xì)胞的活力；經(jīng)慢病毒感染5天后，DDX49沉默組