依托泊苷聯(lián)合順鉑對骨肉瘤細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：
　?。?）取凍存的骨肉瘤細胞復(fù)蘇后體外培養(yǎng)建立細胞模型，為后續(xù)研究提供實驗基礎(chǔ)。（2）觀察依托泊苷和順鉑兩藥單獨及聯(lián)合用藥對骨肉瘤細胞增殖和凋亡的影響，探討依托泊苷聯(lián)合順鉑對肉瘤細胞增殖和凋亡的作用，為骨肉瘤的治療提供新方案。
　　方法：
　?。?）取凍存骨肉瘤細胞，經(jīng)過復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代等步驟,觀察細胞的生長情況。（2）①不同濃度的依托泊苷及順鉑單獨或聯(lián)合作用于生長良好的骨肉瘤細胞，培養(yǎng)24h、48h、72h后

2、,使用MTT法檢測各實驗孔的光密度值(OD值)。②倒置相差顯微鏡觀察空白對照組、依托泊苷組、順鉑組和兩藥聯(lián)合組的細胞形態(tài)和生長增殖情況變化。③用流式細胞儀檢測兩藥單獨及聯(lián)合作用于骨肉瘤細胞后細胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　（1）凍存的骨肉瘤細胞，經(jīng)復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳至第三代，得到生長旺盛、活性好的骨肉瘤細胞。倒置顯微鏡下觀察，細胞具有典型的骨肉瘤細胞形態(tài)。
　?。?）①MTT法結(jié)果：各組藥物均對骨肉瘤細胞的生長有抑制作用

3、，在一定范圍內(nèi)隨藥物濃度增加和作用時間延長而增強，具有明顯的時間和劑量依賴性。與兩藥單獨使用相比較，聯(lián)合用藥更能有效抑制骨肉瘤細胞增殖。②倒置相差顯微鏡下觀察，傳至第三代的骨肉瘤細胞生長旺盛，活力好，具有典型的骨肉瘤細胞形態(tài)。加藥后倒置顯微鏡下觀察：空白對照組骨肉瘤細胞呈多角形，核圓，細胞貼壁生長良好。單用依托泊苷及順鉑時，骨肉瘤細胞形態(tài)呈不規(guī)則，表現(xiàn)出不同程度的細胞皺縮，邊緣毛糙，部分細胞的染色質(zhì)固縮，聚集于細胞核的邊緣，胞漿濃縮。少

4、量細胞凋亡脫落呈圓形，懸浮于細胞培養(yǎng)基中。兩藥聯(lián)用時可見大量細胞凋亡脫落且懸浮于培養(yǎng)液中，只剩少數(shù)形態(tài)不規(guī)則細胞貼壁。③流式細胞儀結(jié)果：單一用藥組與對照組比較，檢測細胞凋亡率差異有顯著性(P<0.05)。兩藥聯(lián)合組與單一用藥組比較，檢測細胞凋亡率差異有顯著性(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　（1）依托泊苷與順鉑聯(lián)合用藥可以顯著抑制骨肉瘤細胞的增殖，促進其凋亡。
　?。?）依托泊苷與順鉑聯(lián)合用藥對骨肉瘤細胞增殖的抑制作