順鉑和阿霉素誘導(dǎo)U2骨肉瘤細(xì)胞周期阻滯及凋亡通路的研究.pdf

1、目的：探討化療藥順鉑和阿霉素?fù)p傷人U2骨肉瘤細(xì)胞（U2-OS）后p53、bcl-2、c-myc基因表達(dá)情況的變化及其誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯及凋亡的情況，為骨肉瘤化療耐藥的解決提供理論依據(jù)。 方法：分別使用0.3、3.0、30μg/ml順鉑、0.06、0.6、6.0μg/ml阿霉素作用于U2-OS細(xì)胞2h后繼續(xù)培養(yǎng)0、6、12、24、48h，采用噻唑蘭比色法（MTT法）檢測U2-OS細(xì)胞生長抑制率。流式細(xì)胞術(shù)、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT

2、-PCR）、蛋白免疫印跡（WesternBlot）檢測順鉑和阿霉素?fù)p傷后繼續(xù)培養(yǎng)6、24h后細(xì)胞細(xì)胞周期變化、凋亡率及p53、bcl-2、c-myc基因表達(dá)情況。 結(jié)果：不同濃度順鉑、阿霉素?fù)p傷U2-OS細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng)6h，流式細(xì)胞術(shù)檢測各組G1期細(xì)胞分別為67.97％、79.64％、78.09％、80.21％、78.25％、79.13％、79.92％，而p53基因mRNA和蛋白表達(dá)和空白對照組比較均增加，bcl-2、c-myc

3、的表達(dá)和空白對照組比較無變化，細(xì)胞生長抑制率無明顯統(tǒng)計學(xué)差異；繼續(xù)培養(yǎng)24h，②、③、④、⑤、⑥、⑦組細(xì)胞生長抑制率分別為31.58％、44.12％、59.46％、23.40％、40.31％、57.56％，②、③、④組之間，⑤、⑥、⑦組之間有明顯組間差異；流式細(xì)胞術(shù)檢測④、⑦組細(xì)胞凋亡率分別為10.04％、14.55％，細(xì)胞周期以G2期細(xì)胞為主。②、③、④組p53、bcl-2和c-mycmRNA及蛋白表達(dá)有組間差異，⑤、⑥、⑦組p53、

4、bcl-2和c-mycmRNA及蛋白表達(dá)有組間差異。繼續(xù)培養(yǎng)48h，各組細(xì)胞生長抑制率增高。 結(jié)論：不同濃度的順鉑和阿霉素短時間（2h）損傷U2-OS細(xì)胞仍有細(xì)胞增殖抑制作用，這種作用與細(xì)胞DNA損傷后p53、bcl-2、c-myc基因表達(dá)變化有關(guān)；U2-OS細(xì)胞DNA損傷后6h即表現(xiàn)出明顯的p53基因的表達(dá)增強并誘導(dǎo)G1期細(xì)胞周期阻滯；繼續(xù)培養(yǎng)24h，p53、bcl-2、c-myc基因表達(dá)變化與藥物濃度有關(guān)聯(lián)且誘導(dǎo)G2細(xì)胞周期