IFN-γ協(xié)同TRAIL誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制.pdf

1、腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(tumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand，TRAIL)是腫瘤壞死因子超家族成員(tumornecrosisfactor，TNF)它選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、對正常組織細(xì)胞沒有明顯毒副作用的特性使人們對其治療腫瘤的前景寄予厚望[1]。但是，近來文獻(xiàn)報(bào)道[2,3]，部分腫瘤對TRAIL不敏感甚至耐受。因此，如何提高TRAIL的抗腫瘤活性、克服TRAIL的

2、耐藥性成為目前TRAIL研究的熱點(diǎn)。我們通過TRAIL與IFN-γ聯(lián)合作用，觀察他們協(xié)同抗腫瘤的作用及對正常成纖維細(xì)胞的毒性，初步探討協(xié)同作用的機(jī)制，為進(jìn)一步研究TRAIL耐藥以及逆轉(zhuǎn)或致敏這種耐藥提供理論基礎(chǔ)。 材料與方法骨肉瘤細(xì)胞株(MG-63)由浙江大學(xué)腫瘤研究所提供，正常人成纖維細(xì)胞(NHF)由浙江大學(xué)邵逸夫醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室保存，DMEM培養(yǎng)液和胰蛋白酶購自吉諾生物公司，新生小牛血清和胎牛血清購自四季青生物公司，人重組可溶

3、性TRAIL購自Bioscience公司，人重組IFN-γ購自上?？寺∩锕?，MTT購自Sigma公司，Trizol為Invitrogen產(chǎn)品，Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶(M-MIV)和RNA酶抑制劑均為Promega公司產(chǎn)品，Marker(DL2000)購自Takara公司，AnnexinV試劑盒購自Biovision公司。流式細(xì)胞儀(Beckman-Coulter公司)、凝膠成像掃描儀(Bio-RAD公司)、凝膠定量分析軟件Quantit

4、yoneV4.1.0(Bio-RAD公司)、全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Bio-RAD公司)、PCR熱循環(huán)儀(PerkinElmer)等由邵逸夫醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室提供，電子顯微鏡(Philips公司)標(biāo)本的制作和掃描由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院電鏡室?guī)椭瓿?。引物由上海生工生物公司合成，引物設(shè)計(jì)參考文獻(xiàn)[4]。用相差顯微鏡和電鏡觀察MG-63細(xì)胞經(jīng)TRAIL、IFN-γ、TRAIL+IFN-γ作用后細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化；MTT法檢測不同實(shí)驗(yàn)組MG-63細(xì)胞和NHF細(xì)胞的