TRAIL聯(lián)合阿霉素和IFN–γ對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞及TRAIL相關(guān)受體影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ單獨(dú)作用對(duì)MG-63細(xì)胞增殖及凋亡的調(diào)節(jié)作用
　　 背景與目的：腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）能夠誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,但并不是所有的腫瘤細(xì)胞都對(duì)其敏感。以往研究表明一些化療藥物能夠增強(qiáng)TRAIL所誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡。本部分實(shí)驗(yàn)旨在研究TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ分別作用于人骨肉瘤MG-63細(xì)胞時(shí)，對(duì)其增殖的抑制作用及誘導(dǎo)凋亡

2、作用。
　　 方法：采用MTT法檢測(cè)TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ在不同濃度及不同時(shí)間下，分別作用于人骨肉瘤MG-63細(xì)胞時(shí)，對(duì)其增殖的抑制作用。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ分別作用于人骨肉瘤MG-63細(xì)胞時(shí)，誘導(dǎo)其凋亡的作用。DNA凝膠電泳檢測(cè)TRAIL作用于人骨肉瘤MG-63細(xì)胞后人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的凋亡率。
　　 結(jié)果：⑴不同濃度TRAIL對(duì)MG-63細(xì)胞均具有殺傷作用。當(dāng)TRAI

3、L濃度較低（小于1000ng/ml）時(shí)，殺傷作用的增加不明顯，相同時(shí)間不同濃度組比較，差異無(wú)顯著性（P>0.05）；而當(dāng)其濃度增高時(shí)，相同時(shí)間不同濃度組比較，差異有顯著性（P＜0.05)。⑵阿霉素可殺傷MG-63細(xì)胞，藥物對(duì)細(xì)胞的殺傷率隨著藥物濃度的增高而增加，相同時(shí)間不同濃度組間比較差異具有顯著性（P＜0.05)。⑶順鉑可殺傷人骨肉瘤MG-63細(xì)胞，藥物對(duì)細(xì)胞的殺傷率隨著藥物濃度的增高而增加，相同時(shí)間不同濃度組間比較差異具有顯著性（P

4、＜0.05)。⑷IFN-γ可殺傷骨肉瘤細(xì)胞，這種殺傷作用在24小時(shí)內(nèi)較弱，24小時(shí)后顯著增大（P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴TRAIL濃度在高于1000ng/ml時(shí)，對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的殺傷效果增加明顯。⑵阿霉素濃度在高于4.3μl/ml時(shí)，對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的殺傷效果增加明顯。⑶順鉑濃度在高于1μmol/ml時(shí)，對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的殺傷效果增加明顯。⑷IFN-γ殺傷作用在24小時(shí)內(nèi)對(duì)人骨肉瘤MG-63較弱，

5、24小時(shí)后顯著增大。
　　 第二部分：TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ聯(lián)合作用對(duì)MG-63細(xì)胞增殖及凋亡的調(diào)節(jié)作用
　　 背景與目的：化療是治療骨肉瘤的一種常用手段，但化療藥物對(duì)機(jī)體的毒副作用大，因而限制了其臨床上的應(yīng)用。因此，如何調(diào)整化療藥物劑量、減少其副作用是當(dāng)前非手術(shù)治療骨肉瘤的重點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ聯(lián)合對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞凋亡的作用。
　　 方法：采用MTT法檢測(cè)

6、當(dāng)由TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ組成的不同組合，分別作用于人骨肉瘤MG-63細(xì)胞時(shí)，對(duì)其增殖的抑制作用。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)由TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ組成的不同組合，分別作用于人骨肉瘤MG-63細(xì)胞時(shí)，誘導(dǎo)其凋亡的作用。
　　 結(jié)果：⑴TRAIL聯(lián)合阿霉素及INF-γ組對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞生長(zhǎng)的影響相比其他聯(lián)合應(yīng)用組明顯增加，差異有顯著性（P＜0.05)。⑵TRAIL聯(lián)合順鉑及INF-γ組對(duì)人骨肉瘤MG-63

7、細(xì)胞生長(zhǎng)的影響相比其他聯(lián)合應(yīng)用組增加明顯，差異有顯著性（P0.05)。
　　 結(jié)論：⑴TRAIL聯(lián)合阿霉素及INF-γ組對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63細(xì)胞的殺傷效果增加明顯。⑵TRAIL聯(lián)合順鉑及INF-γ組對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63細(xì)胞的殺傷效果增加明顯。
　　 第三部分：TRAIL、阿霉素、IFN-γ聯(lián)合作用于人骨肉瘤MG-63時(shí)TRAIL相關(guān)受體表達(dá)研究
　　 背景與目的：目前認(rèn)為細(xì)胞表面死亡受體的表達(dá)狀況,可以從

8、一定程度上反映靶細(xì)胞對(duì)TRAIL誘導(dǎo)凋亡的敏感度。如何通過(guò)上調(diào)死亡受體的表達(dá)水平而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL的敏感性,使TRAIL選擇性殺傷癌細(xì)胞成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)本實(shí)驗(yàn)旨在研究TRAIL、阿霉素、IFN-γ聯(lián)合作用于骨肉瘤MG-63細(xì)胞引起凋亡作用的機(jī)制。
　　 方法：采用免疫組化法檢測(cè)收集的病人骨肉瘤石蠟切片中DR5及YY1基因表達(dá)情況。
　　 用RT-PCR法檢測(cè)TRAIL、阿霉素、IFN-γ組成的不同組合，分別作

9、用于人骨肉瘤MG-63細(xì)胞后人骨肉瘤MG-63中DR5及YY1的表達(dá)情況。用western blot法檢測(cè)TRAIL、阿霉素、IFN-γ組成的不同組合，分別作用骨肉瘤MG-63細(xì)胞后，人骨肉瘤MG-63細(xì)胞中DR5及YY1的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：⑴收集的病人骨肉瘤細(xì)胞中DR5與YY1基因表達(dá)情況未發(fā)現(xiàn)有顯著相關(guān)性（P>0.05）。⑵TRAIL聯(lián)合阿霉素及INF-γ對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞中DR5及YY1的表達(dá)有較明顯影響，差異