TRAIL與阿霉素聯(lián)合應用誘導骨肉瘤細胞株MG-63凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL）是腫瘤壞死因子家族的成員，它可以選擇性誘導腫瘤細胞凋亡面對正常組織細胞無明顯的毒副作用，在腫瘤治療方面有著良好的前景和潛在的應用價值。但一些腫瘤對TRAIL并不敏感，因而目前的研究傾向于TRAIL與放化療聯(lián)合應用。本實驗以體外培養(yǎng)的人骨肉瘤細胞株MG-63為模型，觀察TRAIL對

2、MG-63細胞抑制增殖、誘導凋亡的效應，判斷TRAIL與臨床上常用的化療藥阿霉素聯(lián)合應用是否具有協(xié)同作用，并初步分析其可能的作用機制，以期為骨肉瘤的治療提供新的策略。 方法：將MG-63細胞用含10%小牛血清的DMEM（含非必需氨基酸）培養(yǎng)基置于37℃、5%CO2孵箱內常規(guī)培養(yǎng)。取對數(shù)生長期的細胞，采用MTT比色法分析TRAIL與阿霉素單獨作用和聯(lián)合作用時骨肉瘤MG-63細胞的抑制率及存活率：利用倒置相差顯微鏡觀察細胞凋亡的形態(tài)

3、變化；用流式細胞儀（FCM）檢測細胞凋亡率；半定量RT-PCR方法檢測DR4、DR5、Caspase-8和Bcl-2 mRNA基因表達變化；實驗數(shù)據(jù)用SPSS13．0軟件分析。 結果：MTT和FCM結果表明TRAIL和阿霉素對骨肉瘤MG-63細胞的活性均有抑制作用，二者合用可以協(xié)同抑制細胞活性和誘導凋亡。倒置相差顯微鏡觀察，TRAIL組作用24小時后部分細胞變小，變圓，而聯(lián)合用藥組還可見細胞胞膜彎曲，胞質濃縮，及細胞破裂死亡的碎

4、片。半定量RT-PCR結果顯示：聯(lián)合應用組DR4、DR5和caspase-8的mRNA的表達增加，與TRAIL單用組具有顯著差別（P<0．05）；Bcl-2的mRNA表達量無明顯變化（P>0．05）。 結論： 1、TRAIL可以通過凋亡的方式抑制體外培養(yǎng)的骨肉瘤細胞株MG-63增殖，并存在著一定的劑量依賴關系。 2、TRAIL與ADM聯(lián)合應用對誘導MG-63細胞凋亡具有協(xié)同作用。 3、TRAIL與ADM聯(lián)