腺相關(guān)病毒介導(dǎo)KiSS-1基因轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG-63細胞的實驗研究.pdf

1、目的： 構(gòu)建KiSS-1基因腺相關(guān)病毒載體并轉(zhuǎn)染并構(gòu)建穩(wěn)定表達KiSS-1的骨肉瘤MG-63細胞株，檢測KiSS-1基因的表達，從而進一步研究腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)KiSS-1基因體外轉(zhuǎn)染后對骨肉瘤細胞的增殖、侵襲、粘附、趨化運動的影響。 方法： 1、KiSS-1腺相關(guān)病毒載體構(gòu)建。 2、陽離子脂質(zhì)體法介導(dǎo)KiSS-1基因轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG-63細胞株。 3、RT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染前后后KiSS-1基因轉(zhuǎn)

2、錄水平，Western blot法檢測轉(zhuǎn)染前后蛋白的表達。 4、細胞增殖實驗檢測轉(zhuǎn)染后細胞增殖能力變化。 5、Tmnswell小室、Millicell法、細胞粘附實驗等檢測轉(zhuǎn)染前后MG63增殖、侵襲、趨化運動、粘附能力的變化。 結(jié)果： 1、KiSS-1腺相關(guān)病毒載體構(gòu)建：胎盤組織抽提總RNA并通過RT-PCR獲得目的基因ORF，經(jīng)TA克隆將目的基因連入PSNAV2中，送測序結(jié)果無誤。 2、陽性脂質(zhì)

3、體法介導(dǎo)KiSS-1基因轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG-63細胞株，經(jīng)G418抗性篩選獲得穩(wěn)定表達KISS-1的MG-63細胞株。 3、轉(zhuǎn)染前后的：MG63細胞株的KISS-1基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達水平有明顯差異。 4、轉(zhuǎn)染KiSS-1基因的MG-63細胞較其親代細胞增殖能力明顯降低。 5、轉(zhuǎn)染KiSS-1基因的MG-63細胞較其親代腫瘤細胞的侵襲能力明顯下降。 6、穩(wěn)定表達KiSS-1基因的MG63細胞與內(nèi)皮細胞、層粘連蛋

4、白FN、細胞外基質(zhì)Matrigel的粘附能力明顯下降。 7、穩(wěn)定表達KiSS-1的MG-63細胞較KiSS-1表達缺陷的MG-63細胞遷移能力明顯降低。 結(jié)論： 1、利用脂質(zhì)體將KiSS-1基因轉(zhuǎn)染到骨肉瘤MG63細胞是可行、有效、穩(wěn)定的。 2、PSNAV2.0-KISS-1能夠介導(dǎo)目的基因在在骨肉瘤細胞內(nèi)穩(wěn)定、高效地表達。 3、轉(zhuǎn)染KiSS-1基因的骨肉瘤MG63細胞增殖能力明顯受抑制。