Prohibitin在人成骨肉瘤MG-63細(xì)胞凋亡過程中的變化及其調(diào)控作用研究.pdf

1、本論文以姜黃素誘導(dǎo)人成骨肉瘤MG-63細(xì)胞凋亡，運(yùn)用亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對MG-63細(xì)胞凋亡前后核基質(zhì)蛋白的組成變化進(jìn)行系統(tǒng)分析，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡過程中的特異核基質(zhì)蛋白Prohibitin表達(dá)下調(diào)。生物信息學(xué)初步分析顯示差異表達(dá)蛋白參與了細(xì)胞死亡和存活以及細(xì)胞周期等調(diào)控過程，涉及G2/M期DNA損傷檢驗(yàn)點(diǎn)調(diào)控、Myc介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡等信號通路，而Prohibitin是其中的關(guān)鍵調(diào)控蛋白。在此基礎(chǔ)上，對Prohibitin在MG-63細(xì)胞誘導(dǎo)凋

2、亡前后的表達(dá)和定位變化，及其與相關(guān)癌基因、抑癌基因產(chǎn)物的共定位及相互作用關(guān)系進(jìn)行了研究。蛋白質(zhì)免疫印跡雜交證實(shí)在人成骨肉瘤MG-63細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡后，Prohibitin在核基質(zhì)中的表達(dá)下調(diào)。運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和激光共聚焦顯微鏡觀察誘導(dǎo)凋亡前后Prohibitin在細(xì)胞內(nèi)的定位，結(jié)果顯示Prohibitin在MG-63細(xì)胞中與c-Myc、Bax、Fas、Bcl-2、P53和Rb等具有不同程度的共定位關(guān)系，且在姜黃素處理后其共定位區(qū)域發(fā)生

3、了變化。利用原核表達(dá)純化GST-PHB融合蛋白和GSTpull-down技術(shù)確證了Prohibitin與Bax、c-Myc和P53有直接的相互作用。進(jìn)一步通過構(gòu)建真核表達(dá)載體pEGFP-C1-phb并轉(zhuǎn)染MG-63細(xì)胞，觀察結(jié)果表明Prohibitin在姜黃素誘導(dǎo)凋亡前后發(fā)生了細(xì)胞內(nèi)的定位變化。
　　 研究結(jié)果顯示MG-63細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡前后Prohibitin在核基質(zhì)中的表達(dá)發(fā)生了顯著改變，表明Prohibitin在腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)

4、凋亡過程中發(fā)揮了重要作用，隨后的實(shí)驗(yàn)確證了Prohibitin亞細(xì)胞定位的改變及其與相關(guān)癌基因、抑癌基因產(chǎn)物之間的相互作用關(guān)系，初步揭示了腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡過程中Prohibitin的相互作用網(wǎng)絡(luò)，生物信息學(xué)分析從較為整體的水平闡釋了其在凋亡過程中的分子調(diào)控機(jī)制。由此提示了Prohibitin生物功能的發(fā)揮可能受其亞細(xì)胞定位及其與相關(guān)蛋白的相互作用的影響，這為更深入研究Prohibitin的生物功能指明了方向，而對Prohibitin在細(xì)