核基質(zhì)蛋白在人成骨肉瘤MG-63細(xì)胞凋亡過程中的變化研究.pdf

1、本文在鑒定姜黃素(curcumin，Cur)誘導(dǎo)人成骨肉瘤MG-63細(xì)胞凋亡的基礎(chǔ)上，應(yīng)用選擇性抽提整裝透射電鏡和蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，對MG-63細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡過程中核基質(zhì)一中間纖維系統(tǒng)的構(gòu)型變化和核基質(zhì)蛋白組成的變化進(jìn)行系統(tǒng)研究。分析鑒定與腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)的特異核基質(zhì)蛋白，并探索它們在腫瘤細(xì)胞凋亡過程中的調(diào)控作用，以期能夠在較為整體的水平上進(jìn)一步認(rèn)識腫瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)理，從而找出腫瘤細(xì)胞凋亡研究的新方向。 實驗結(jié)果顯示，經(jīng)7.5

2、 μ g/mL姜黃素處理之后，人成骨肉瘤MG-63細(xì)胞的增殖受到明顯抑制，發(fā)生了G0/G1期阻滯，出現(xiàn)明顯的亞G0/G1期凋亡峰，光鏡和透射電鏡觀察結(jié)果顯示，經(jīng)姜黃素誘導(dǎo)處理后的MG-63細(xì)胞出現(xiàn)了細(xì)胞形態(tài)規(guī)則、核質(zhì)比例減小、細(xì)胞核固縮、核內(nèi)染色質(zhì)凝聚、線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)網(wǎng)腔擴(kuò)大、出現(xiàn)凋亡小體等顯著的凋亡特征；而且凋亡相關(guān)基因bc1-2和突變型p53的表達(dá)下調(diào)、bax和fas基因的表達(dá)上調(diào)，并且出現(xiàn)細(xì)胞凋亡特征性DNA降解梯狀條帶；選擇

3、性抽提整裝光鏡和電鏡觀察顯示，經(jīng)姜黃素處理的MG-63細(xì)胞的核基質(zhì)和中間纖維比對照組明顯稀疏，且分布更加不均勻，并分別與核纖層連系，形成趨于斷裂但相對還較為完整的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；雙向凝膠電泳分析顯示在姜黃素誘導(dǎo)MG-63細(xì)胞凋亡前后存在27個差異表達(dá)的核基質(zhì)蛋白，經(jīng)質(zhì)譜分析，鑒定了其中的21個蛋白，其中在凋亡的MG-63細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)的蛋白鑒定為：DNA斷裂誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄子DNA-damage-inducible transcript 4-like

4、、盤狀結(jié)構(gòu)域Discoidin、DNA聚合酶 zeta等7種蛋白；表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)為：Prohibitin、Glutamatedehydrogenase、Vimentin、Human Nucleophosmin、Heat-shock 70等14種蛋白。其中除Vimentin、Prohibitin、Nucleophosmin和Hsp70外，其余均為首次在核基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)。 研究結(jié)果表明，7.5 μg/mL姜黃素對人成骨肉瘤MG