Noscapine聯合Cisplatin誘導骨肉瘤MG-63增殖抑制和細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、骨肉瘤是兒童和青少年最常見的起源于間充質細胞的惡性骨腫瘤。隨著骨肉瘤治療手段的進展，如擴大切除術、放療和新輔助化療，其5年生存率已經增加到50—60％。以鉑類為基礎的藥物，如順鉑(cisplatin)，是骨肉瘤化療常用的有效的藥物。為了提高骨肉瘤患者的總的生存率，進一步研究新的有效的治療方法是必要的，比如新的化療藥，介入治療和基因治療。而進一步提高骨肉瘤治療效果的關鍵則在于加強基礎研究，對其發(fā)病機理和分子生物學特性的進一步闡明可以進一步

2、推動新型的分子水平的靶向治療藥物的發(fā)展和新的治療方案的產生。過去幾十年中，諾斯卡品(noscapine)-直被用作鎮(zhèn)咳藥。近年來發(fā)現諾斯卡品及其衍生物可作用于微管，抑制其動態(tài)不穩(wěn)定性，從而干擾腫瘤細胞的有絲分裂，能夠抑制多種腫瘤細胞增殖和血管生成，并誘導凋亡。諾斯卡品在腫瘤細胞和動物腫瘤模型的實驗研究中表現出良好的抗腫瘤活性，能夠抑制多種腫瘤細胞增殖和血管生成，并誘導凋亡，表現出良好的抗腫瘤活性，更為重要的在動物實驗研究中，各種劑量的諾

3、斯卡品對組織或器官無任何明顯的毒副作用，對體液免疫和組織也沒有明顯的抑制作用。其作用機制仍然沒有完全闡明，正是本實驗的研究目的所在。
　　 目的：諾斯卡品是一種來自于罌粟屬鴉片的鄰苯二甲酸異喹啉生物堿。在過去幾十年中一直被用作鎮(zhèn)咳藥，亦有治療卒中和水腫的報道，而且諾斯卡品無鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜和呼吸抑制等藥理作用。已經有實驗證實諾斯卡品對多種腫瘤細胞和動物腫瘤模型中具有良好的抗腫瘤活性。本實驗的目的是研究諾斯卡品對人骨肉瘤細胞的增殖抑制和

4、誘導凋亡作用，并探討其機制。
　　 方法：不同濃度的諾斯卡品(50，100，200μmol/L)和/或順鉑(10μg/ml)作用于人類骨肉瘤MG-63細胞系24，48小時，選用各種方法觀察形態(tài)學和分子生物學特性的改變。細胞增殖抑制試驗(MTT方法)觀察不同濃度諾斯卡品聯合順鉑對MG-63細胞增殖的影響；流式細胞術檢測諾斯卡品及聯合順鉑誘導MG-63細胞的凋亡；蛋白免疫印跡法(Western Blotting)檢測不同藥物處理后一

5、些凋亡相關蛋白表達水平的變化，包括Bax，Bcl-2，survivin，caspase-3等。統(tǒng)計學處理用SPSS13.0軟件完成，計量資料數據表示方式以平均值±標準差(Mean±SD)，兩組計量資料采用非獨立樣本t檢驗，各組指標間的相關性采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學顯著性意義。
　　 結果：骨肉瘤MG-63細胞經過諾斯卡品(50，100，200μmol/L)和/或Cisplatin(10μg/m

6、l)處理24，48h后，細胞增殖抑制實驗(MTT)證實諾斯卡品和順鉑均能夠抑制MG-63細胞的增殖，并且諾斯卡品呈現劑量依賴效應。諾斯卡品聯合順鉑對MG-63細胞的生長具有協同抑制作用。倒置顯微鏡觀察藥物干預后的MG-63細胞，發(fā)現細胞體積變小、皺縮、變圓、脫落。利用流式細胞儀分析藥物作用后的MG-63細胞，檢測到Gl期阻滯和凋亡，并且諾斯卡品(100μmol/L)和順鉑(10μg/ml)聯合的凋亡率明顯的高于其他的實驗組。Westem

7、 Blot結果顯示諾斯卡品聯合順鉑可以明顯降低survivin、bcl-2的表達，以及檢測到caspase-3，PARP的裂解片段表達的變化，JNK途徑的標志性蛋白p-c-jun表達上調，ERK MAPK途徑標志性蛋白p-erk表達下調。
　　 結論：本實驗以人骨肉瘤細胞系MG-63為對象，研究諾斯卡品對骨肉瘤細胞的增殖抑制和誘導凋亡作用。研究表明諾斯卡品可以明顯抑制骨肉瘤細胞的增殖并促進凋亡。其作用可能與JNK途徑的激活有關，