維甲酸誘導(dǎo)人成骨肉瘤MG-63細(xì)胞分化過(guò)程中核基質(zhì)構(gòu)型及其蛋白組成變化研究.pdf

1、本文在鑒定維甲酸(retinoicacid，RA)誘導(dǎo)人成骨肉瘤MG-63細(xì)胞終末分化的基礎(chǔ)上，應(yīng)用選擇性抽提、整裝透射電鏡和蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，對(duì)MG-63細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中核基質(zhì)-中間纖維系統(tǒng)的構(gòu)型變化和核基質(zhì)蛋白組成的變化進(jìn)行系統(tǒng)研究。分析鑒定與腫瘤增殖分化相關(guān)的特異核基質(zhì)蛋白，并探索它們?cè)谀[瘤細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中的調(diào)控作用，以期能夠在較為整體的水平上進(jìn)一步認(rèn)識(shí)細(xì)胞癌變與逆轉(zhuǎn)機(jī)理，從而找出細(xì)胞增殖與分化調(diào)控研究的新方向。 實(shí)

2、驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)1μmol/LRA處理之后，人成骨肉瘤MG-63細(xì)胞的增殖受到了明顯抑制，發(fā)生了G0/G1期阻滯，細(xì)胞形態(tài)改變的同時(shí)伴隨著癌基因c-myc、c-fos的表達(dá)下調(diào)和抑癌基因Rb、p27的上調(diào)表達(dá)。并且RA能夠促進(jìn)MG-63細(xì)胞Ⅰ型膠原、骨鈣蛋白、骨粘素和骨結(jié)節(jié)等骨特異性標(biāo)志物的表達(dá)和形成。選擇性抽提整裝透射電鏡觀察顯示經(jīng)RA處理后MG-63細(xì)胞的核基質(zhì)-中間纖維系統(tǒng)構(gòu)型發(fā)生了恢復(fù)性變化，由腫瘤細(xì)胞核基質(zhì)不規(guī)則聚積的纖維結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)

3、變?yōu)閷哟畏置?、精?xì)發(fā)達(dá)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。雙向凝膠電泳分析顯示在RA誘導(dǎo)MG-63細(xì)胞分化前后存在43個(gè)差異表達(dá)的核基質(zhì)蛋白，經(jīng)質(zhì)譜分析，鑒定了其中的25個(gè)蛋白。其中在分化的MG-63細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)的蛋白鑒定為熱休克蛋白HSP70，Cyclin折疊蛋白1，actin，14號(hào)染色體ORF10編碼的蛋白，轉(zhuǎn)錄延伸因子A，nucleophosmin蛋白，hnRNPA2/B1和prohibitin;表達(dá)上調(diào)和新出現(xiàn)的蛋白質(zhì)為鋅指蛋白ZNF710，ZYG

4、11B蛋白，孤兒核受體NR1D2，RAS家族RAB3D蛋白，Rb結(jié)合蛋白R(shí)BBP7，vimentin，泛素化水解酶UCHinteractingprotein，MHCⅠ類(lèi)抗原，類(lèi)CDK蛋白3，免疫球蛋白超家族成員DORA蛋白和泛素相關(guān)蛋白sentrin家族成員SUMO-4。其中除vimentin，actin，HSP70，nucleophosmin和RBBP7外，均屬首次在核基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)。 研究結(jié)果表明，1μmol/LRA對(duì)人成骨肉瘤