異硫氰酸鹽促進阿霉素誘導人骨肉瘤細胞凋亡的實驗研究.pdf

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3、：本文旨在探討異硫氰酸鹽與阿霉素在體外聯(lián)合作用人骨肉瘤細胞(U2一OS)后對細胞凋亡的影響，證明異硫氰酸鹽能促進阿霉素誘導U2—0S細胞凋亡，并討論其可能的作用機制，為骨肉瘤的臨床治療提供一定的參考。方法：將凍存的U2OS細胞復蘇培養(yǎng)后鏡下觀察拍照，了解細胞活性，并選取第二代生長良好的U2OS細胞作為實驗對象；分別以lug／ml、25ug／ml、5ug／ml、lOug／ml、25ug／ml濃度的阿霉素和2uM／ml，4uM／ml，8uM

4、／ml，16uM／ml，32uM／ml，64uM／ml濃度的異硫氰酸鹽單獨作用于呈對數(shù)期生長的U2OS細胞，檢測藥物對細胞增殖抑制率的影響，計算IC50的數(shù)值；然后將lug／ml、3ug／ml、lOug／ml的阿霉素分別與2uM／ml、25uM／ml、4uM／ml、的異硫氰酸鹽聯(lián)合作用于U2OS細胞24h后，MTT法進行細胞抑制率的測算，并繪制抑制率與濃度直方圖，計算Q值來評估兩藥聯(lián)合作用的效應，得到最佳的藥物作用濃度；根據(jù)最佳作用濃度

5、，隨機將細胞分為空白組、阿霉素組、異硫氰酸鹽組及聯(lián)合用藥組四組，作用24小時后通過流式細胞儀檢測細胞凋亡率，比較各組細胞凋亡率的變化情況；同樣根據(jù)最佳作用濃度，以相同的分組方法檢測caspase3因子的活性情況及用TUNEL試劑盒檢測細胞凋亡，比較各組細胞凋亡率的變化情況，并與流式細胞儀結(jié)果比較看變化的趨勢是否一致；在作用機制的探討中我們先選用AAH—APO—l芯片(細胞凋亡抗體芯片)來檢測相關(guān)的凋亡因子，隨機將培養(yǎng)好的細胞分為4組，分