雷公藤紅素通過ROS-JNK通路誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡和自噬的研究.pdf

1、骨肉瘤是兒童和青少年最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤，具有早期肺轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)率等特點(diǎn)。采用手術(shù)、新輔助化療等綜合治療方案后，療效有了顯著提高，但是仍有30％-50％的局部骨肉瘤終將復(fù)發(fā);對(duì)于復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移性骨肉瘤，目前尚無有效方法，療效極差。盡管新輔助化療結(jié)合手術(shù)已可將骨肉瘤患者的5年生存率提高到60-80％，但近30年來患者的生存率始終沒有進(jìn)一步的提高。同時(shí)，高劑量的化療藥物如甲氨蝶呤、阿霉素、順鉑、異環(huán)磷酰胺等帶來的副作用很大。因此，尋找一種

2、新型有效、安全的治療方法是目前亟需解決的關(guān)鍵問題。雷公藤紅素是傳統(tǒng)中藥雷公藤單體之一，三萜類化合物，具有多重生物藥理活性，不僅能夠抑制免疫反應(yīng)和抗炎癥，近些年來還發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤的活性。同時(shí)關(guān)于雷公藤紅素抗腫瘤的機(jī)制眾所紛紜，包括NF-κB、HSP90、蛋白酶體、MAPK、STAT3等。盡管這些分子靶點(diǎn)都在雷公藤紅素發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)中起到不同程度的作用，但是至今仍不清楚哪一個(gè)或哪幾個(gè)是其直接或主要靶點(diǎn)。在本次研究中，我們發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素通過

3、引起腫瘤細(xì)胞G2/M期阻滯而對(duì)骨肉瘤有較強(qiáng)的抑制增殖作用。同時(shí)雷公藤紅素能激活caspase-3，-8和-9，通過內(nèi)外源兩條途徑引起骨肉瘤細(xì)胞凋亡。我們還發(fā)現(xiàn)自噬在雷公藤紅素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞作用中也起到了重要作用;自噬和凋亡共同促進(jìn)了雷公藤紅素誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞死亡的過程。另外，經(jīng)雷公藤紅素作用后的骨肉瘤細(xì)胞內(nèi)ROS顯著增高，JNK信號(hào)通路被激活。JNK抑制劑能很大程度上抑制雷公藤紅素引起的凋亡和自噬，而ROS抑制劑卻能完全逆轉(zhuǎn)這種效應(yīng)。ROS

4、抑制劑也能阻止JNK通路的激活和G2/M期周期阻滯，說明ROS是雷公藤紅素發(fā)揮作用的核心環(huán)節(jié)。
　　本研究搜集了9例骨肉瘤患者的臨床標(biāo)本，其中包括原發(fā)、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移以及對(duì)化療不同反應(yīng)的骨肉瘤樣本。我們發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素對(duì)這些原代細(xì)胞仍然有很強(qiáng)的抑制增殖作用，流式和蛋白印跡實(shí)驗(yàn)表明雷公藤紅素也引起了原代細(xì)胞中ROS和JNK的激活、凋亡和自噬的產(chǎn)生。在動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，7天雷公藤紅素腹腔注射治療，使裸鼠皮下骨肉瘤體積大大減小，表