雷公藤紅素對(duì)人急性髓系白血病原代細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、授予單位代碼學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?0459200612044100201052級(jí)公開(kāi)文學(xué)論大位州學(xué)鄭士碩(科學(xué)學(xué)位)雷公藤紅素對(duì)人急性髓系白血病原代細(xì)胞增殖和凋亡的影響院系名稱:鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院學(xué)科門類:醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱:內(nèi)科學(xué)(血液內(nèi)科)作者姓名:程薇導(dǎo)師姓名、職稱:馬保根教授2009年05月16日鄭州人學(xué)2009屆碩士學(xué)位論文中文摘要采用密度梯度法分離初診急性髓系白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞，以lx10，ml接種在培養(yǎng)瓶中，37℃、5%co:條

2、件下RPM卜1640中懸浮培養(yǎng)，2一3天換液一次。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞活性大于95%的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2.臺(tái)盼藍(lán)染色活細(xì)胞計(jì)數(shù)法采用臺(tái)盼藍(lán)染色進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。取40川雷公藤紅素處理過(guò)的急性髓系白血病原代細(xì)胞懸液用臺(tái)盼藍(lán)染色后，然后鏡檢100個(gè)細(xì)胞，其中拒染細(xì)胞為活細(xì)胞，染成藍(lán)色細(xì)胞為死細(xì)胞，計(jì)算出活細(xì)胞百分率。3.甲基唆哇基四哇比色法(MTT法)取處于指數(shù)生長(zhǎng)期的未處理急性髓系白血病原代細(xì)胞按lxloomL接種于96孔培養(yǎng)板，150林l

3、孔。實(shí)驗(yàn)孔紅素終濃度分別為l“molL、2林mo泥、5林m0FL和10卜molL，同時(shí)設(shè)置不加藥物的對(duì)照孔和不加藥物與細(xì)胞的調(diào)零孔，均設(shè)4個(gè)復(fù)孔。將培養(yǎng)板放至37oC、5%C02溫箱分別培養(yǎng)3h，6h，1211，24h后，每孔加入M竹20林l，37oC繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心，棄上清，每孔加入150冬:l二甲基亞礬(DMSO)，低速震蕩，使甲攢晶體完全溶解，置酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定每孔的光密度值(OD)。計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，并以藥物濃度

4、為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)抑制曲線，找出雷公藤紅素作用于急性髓系白血病原代細(xì)胞的最適時(shí)間和最適濃度。4.磷脂酸絲氨酸外翻技術(shù)(AnnexinvRTClpl法)采用^nnexinvFxTe用I流式細(xì)胞術(shù)法。取終濃度為l林molL、2林moFL、5林molL、10林molL的雷公藤紅素作用于急性髓系白血病原代細(xì)胞6h及2林molL雷公藤紅素作用3h、6h、12h、24h后的急性髓系白血病細(xì)胞懸液100川，分別加入10林IArmex

5、inVFITe，室溫避光10min后加入碘化丙嚨染色液5林l，避光反應(yīng)smin，加入400林1lx^nnexinvFITe結(jié)合液，混勻，立即上流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)(一般不超過(guò)lh)，試驗(yàn)重復(fù)3次。同時(shí)以不加AnnexinvFITC及PI的一管作為陰性對(duì)照。5.細(xì)胞凋亡峰定量分析(PI單染法)采用PI單染法定量分析細(xì)胞凋亡峰。取終濃度為1卜mol幾、2料molL、5林molL、1郊molL的雷公藤紅素作用于急性髓系白血病原代細(xì)胞6h的細(xì)胞懸