辛伐他汀單獨(dú)或聯(lián)合阿糖胞苷對(duì)急性髓系白血病細(xì)胞株增殖和凋亡影響的研究.pdf

1、目的（1）研究辛伐他汀（simvastatin，SIM）對(duì)急性髓系白血病細(xì)胞株NB4、HL60、KG1細(xì)胞株增殖影響，并初步探求其作用機(jī)制。
　?。?）研究SIM與阿糖胞苷（Cytarabine，Ara-c）聯(lián)合作用于NB4、HL60、KG1等白血病細(xì)胞株后對(duì)細(xì)胞增殖的影響，分析兩藥物是否有協(xié)同作用，并探討其作用機(jī)制。方法（1）細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（Cell Counting Kit，CCK-8）法檢測(cè)不同濃度SIM對(duì)NB4、HL60、

2、KG1三種細(xì)胞株細(xì)胞增殖情況的影響，并計(jì)算各細(xì)胞株的半抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）；并檢測(cè)SIM（后續(xù)試驗(yàn)均采用IC50濃度）聯(lián)合不同解救劑，如甲基戊酸（mevalonate）、鯊烯（squalene）、法尼基焦磷酸鹽（Farnesy pyrophosphate salt，F(xiàn)PP）、香葉基香葉基焦磷酸鹽（Geranylgeranyl pyrophosphate salt

3、,GGPP）等共同培養(yǎng)細(xì)胞株24h后，對(duì)各細(xì)胞增殖率的影響。（2）流式細(xì)胞儀法（flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)SIM單獨(dú)、SIM聯(lián)合不同解救劑處理NB4、HL60、KG1細(xì)胞株24h或48h后各組細(xì)胞凋亡率；以及SIM單獨(dú)或聯(lián)合細(xì)胞毒藥物Ara-c后的。（3）western法檢測(cè)SIM單獨(dú)或聯(lián)合各解救劑共同作用后，RAS和RHO的膜蛋白含量變化。(4)為進(jìn)步一明確SIM是否有化療增敏作用，我們檢測(cè)SIM單獨(dú)或聯(lián)合細(xì)胞毒藥物A

4、ra-c作用NB4、HL60、KG1三細(xì)胞株細(xì)胞后，對(duì)各細(xì)胞株細(xì)胞增殖及凋亡的影響。同時(shí)我們還檢測(cè)了P65/NF-κB在SIM單獨(dú)或聯(lián)合Ara-c作用后的變化。
　　結(jié)果（1）辛伐他汀對(duì)NB4、HL60、KG1等細(xì)胞有增殖抑制作用，均表現(xiàn)出時(shí)間和劑量的依賴(lài)性；但各細(xì)胞株對(duì)SIM敏感程度不同，NB4>HL60>KG1；當(dāng)SIM聯(lián)合不同解救劑作用于三種細(xì)胞株后，結(jié)果表明甲基戊酸、FPP和GGPP對(duì)三細(xì)胞株均有解救作用；而鯊烯對(duì)三細(xì)胞株

5、的增殖抑制無(wú)影響，表明無(wú)解救作用；結(jié)果還表明對(duì)于三細(xì)胞株而言，GGPP的解救效果均優(yōu)于FPP的解救效果。（2）辛伐他汀對(duì)NB4、HL60、KG1等細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡作用，該效應(yīng)也呈時(shí)間劑量依賴(lài)性效應(yīng)；在SIM聯(lián)合甲基戊酸、FPP、GGPP共同作用后，三細(xì)胞的凋亡率較單用SIM處理時(shí)降低(p<0.05)，但是SIM聯(lián)合鯊烯時(shí)與單用SIM相比細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯改變(p>0.05)。（3）SIM能夠下調(diào)NB4、HL60及KG1細(xì)胞膜上RAS和RHO

6、蛋白的表達(dá)量，伴隨藥物作用濃度增加及作用時(shí)間延長(zhǎng)，此下調(diào)效應(yīng)更為顯著；在甲基戊酸、GGPP、和FPP解救SIM作用后兩種蛋白在細(xì)胞膜上的表達(dá)量有不同程度的恢復(fù)，但是鯊烯解救SIM的作用后兩種蛋白在細(xì)胞膜上的含量較單獨(dú)使用SIM時(shí)均無(wú)明顯改善。（4）SIM與低劑量的Ara-c聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞后，細(xì)胞增殖率較對(duì)照組、單用SIM組或單用小劑量Ara-c組有明顯降低（p<0.05），金氏公式計(jì)算NB4、HL60細(xì)胞在兩藥聯(lián)合后Q值分別為
　　

7、1.4734、1.3799，兩藥物具有協(xié)同作用，KG1細(xì)胞Q值為1.1057，具有相加作用。SIM與低劑量的Ara-c聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組、單用SIM組或單用小劑量Ara-c組有明顯增加（p<0.05）。P65/NF-κB表達(dá)水平檢測(cè)表明，單獨(dú)使用小劑量Ara-c后，三細(xì)胞株細(xì)胞核內(nèi)P65/NF-κB表達(dá)水平時(shí)較陰性對(duì)照組增加；而單獨(dú)應(yīng)用SIM處理細(xì)胞后，細(xì)胞核內(nèi)P65/NF-κB表達(dá)水平較陰性對(duì)照組減少；在SIM聯(lián)合Ar

8、a-c共同處理細(xì)胞后，表達(dá)量較陰性對(duì)照組及單獨(dú)使用Ara-c組降低（p<0.05）。
　　結(jié)論（1）SIM對(duì)NB4、HL60、KG1均有抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用，呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴(lài)效應(yīng)，且三細(xì)胞株對(duì)SIM的敏感性不同（NB4>HL60>KG1）。（2）甲基戊酸、GGPP、FPP可不同程度的解救SIM的細(xì)胞毒性作用，而鯊烯卻無(wú)此效應(yīng)。（3）SIM能夠下調(diào)NB4、HL60、KG1細(xì)胞株細(xì)胞膜上RAS和RHO蛋白的表達(dá)量。當(dāng)聯(lián)合甲基