版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、研究背景與目的:
巨噬細胞是腫瘤微環(huán)境中的重要組成成份,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉移過程中發(fā)揮著重要作用,位于腫瘤微環(huán)境中的巨噬細胞通常被稱為“腫瘤相關巨噬細胞”(Tumor-associated macrophages,TAMs)。近年來越來越多的研究表明,在不同的治療方法或腫瘤類型中,TAMs可起到增強或拮抗治療方法的效應,也可在治療后驅動機體修復起到一定作用。經典活化途徑的巨噬細胞( classically activ
2、ated macrophage)亦稱為M1型巨噬細胞,由Th1細胞因子(如干擾素γ)、外源性TNF-α或者內源性TNF-α的誘導劑(如細菌代謝產物脂多糖等)誘導激活,并分泌多種炎癥因子(如IL-6、IL-12、IL-1、TNF-α)、趨化因子(如CCL2、CCL3)以及趨化因子配體(如 CXCL9、CXCL10)等。M1型巨噬細胞能夠殺傷腫瘤細胞、清除感染病原體,同時可作為一種有效的炎癥介質,參與炎癥反應。
雷公藤紅素(Cel
3、astrol,Cel)是一種天然化合物,具有抗炎、抗腫瘤及免疫抑制等多種藥理活性。Cel通過抑制AKT/mTOR/P70S6K通路的活化,抑制血管生成和腫瘤的生長;也可通過調控生存信號通路,如Notch或NF-κB的活性抑制腫瘤細胞的增殖并誘導細胞凋亡;也有研究表明Cel是天然蛋白酶體抑制劑,通過抑制20S蛋白酶體的活性誘導腫瘤細胞凋亡,從而抑制腫瘤的生長。
本研究利用細菌代謝產物脂多糖(Lipopolysaccharides
4、,LPS)誘導巨噬細胞,即M1型巨噬細胞,得到培養(yǎng)上清液,使用上清液(M1 macrophage products/LPS-stimulated macrophage products,LSMP)與Cel單獨或者共同作用于乳腺癌細胞系 MDA-MB-231和前列腺癌細胞系 PC-3,并采用MTT、qRT-PCR以及Western blotting等實驗方法檢測LSMP對Cel導致腫瘤細胞凋亡作用的影響及其潛在的作用機制。結果表明,LSM
5、P具有增強Cel致MDA-MB-231細胞和PC-3細胞凋亡的作用,此作用可能與caspase-3,8,9的激活以及NF-κB通路活化的抑制,進而下調凋亡抑制蛋白XIAP和cIAP1/2的表達有關。這些結果說明,受不同刺激因素作用的巨噬細胞能夠調控腫瘤細胞對化療藥物的敏感性。巨噬細胞可能成為臨床抗腫瘤藥物效應差異研究的新靶點。
研究方法:
1.不同濃度(10%、30%、50%、100%)的LSMP與Cel(1μM、1
6、.5μM)單獨或者共同作用于人乳腺癌細胞株MDA-MB-231和前列腺癌細胞株PC-3,設立空白對照組,采用MTT實驗、克隆形成實驗和劃痕實驗對腫瘤細胞的增殖和遷移能力進行檢測。
2.不同濃度(0%、50%、100%)的LSMP與Cel(1.5μM)單獨或者共同作用于人乳腺癌細胞株MDA-MB-231和前列腺癌細胞株PC-3,設立空白對照組,采用流式細胞技術對腫瘤細胞的凋亡情況進行檢測。
3.不同濃度(30%、50%
7、、100%)的LSMP與Cel(1.5μM)單獨或者共同作用于人乳腺癌細胞株MDA-MB-231和前列腺癌細胞株 PC-3,設立空白對照組,采用Western blotting對不同時間點PARP、pro-caspase-3、pro-caspase-8、pro-caspase-9的蛋白表達水平進行檢測。
4.不同濃度(30%、50%、100%)的LSMP與Cel(1.5μM)單獨或者共同作用于人乳腺癌細胞株MDA-MB-231
8、和前列腺癌細胞株PC-3,設立空白對照組,采用Western blotting方法檢測不同時間點泛素化蛋白(Ub-prs)、IκB和TNF-α的蛋白表達水平以及胞漿和胞核核轉錄因子κB P65(NF-κB-P65)的水平。
5.不同濃度(30%、50%、100%)的LSMP與Cel(1.5μM)單獨或者共同作用于人乳腺癌細胞株MDA-MB-231和前列腺癌細胞株PC-3,設立空白對照組,采用Western blotting對不
9、同時間點的凋亡抑制蛋白XIAP和cIAP1/2的蛋白表達水平進行檢測。
6.利用siRNA干擾NF-κB-P65基因的表達,采用qRT-PCR和Western blotting方法,檢測在LSMP(50%)與Cel(1.5μM)共同作用下NF-κB-P65、XIAP、cIAP1/2的基因和蛋白表達情況。
結果:
1.與Cel單獨作用相比,LSMP與 Cel共同作用,可明顯增加兩種腫瘤細胞的凋亡率,抑制細胞的
10、增殖和遷移。
2.與Cel單獨作用相比,LSMP與Cel共同作用,可明顯促進PARP、pro-caspase-3、pro-caspase-8、pro-caspase-9的降解。
3.與Cel單獨作用相比,LSMP與Cel共同作用下,蛋白酶體活性無顯著變化。
4.與Cel單獨作用相比,LSMP與Cel共同作用,可明顯抑制XIAP、cIAP1/2表達。
5.與Cel單獨作用相比,LSMP與Cel共同作
11、用下,可明顯抑制IκB的降解、核轉錄因子NF-κB-P65的核轉位及NF-κB信號通路的活化,同時降低TNF-α的蛋白表達量。
6.與 LSMP+Vector siRNA作用組相比,LSMP與Cel共同作用,可明顯抑制NF-κB-P65、XIAP、cIAP1/2 mRNA水平和蛋白水平的表達
結論:
研究結果表明:LSMP可增強Cel對人乳腺癌細胞株MDA-MB-231和前列腺癌細胞株PC-3增殖、存活和遷
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 雷公藤紅素對體外胃癌細胞增殖與凋亡的影響.pdf
- 雷公藤紅素對人骨肉瘤細胞增殖、凋亡的影響及作用機制研究.pdf
- 雷公藤紅素與MET抑制劑對肝癌細胞的聯(lián)合抗腫瘤作用.pdf
- 雷公藤紅素對腫瘤細胞中缺氧誘導因子-1α及荷瘤小鼠腫瘤生長的影響.pdf
- 基于E-cadherin調控的雷公藤紅素抗腫瘤作用研究.pdf
- 雷公藤甲素、雷公藤紅素對外周血單個核細胞干擾素刺激基因表達的影響.pdf
- 雷公藤紅素及其酸性重排產物雷公藤酚B衍生物合成和活性評價.pdf
- 雷公藤紅素抑制鎘誘導神經細胞JNK通路激活抗凋亡分子機理研究.pdf
- 番茄紅素對雷公藤多苷致小鼠肝損傷的保護作用研究.pdf
- 雷公藤紅素對人急性髓系白血病原代細胞增殖和凋亡的影響.pdf
- 雷公藤紅素對體外培養(yǎng)的大鼠視網膜血管內皮細胞的作用.pdf
- 中藥復方含藥血清對雷公藤致骨髓細胞凋亡的保護作用及其機制研究.pdf
- 雷公藤紅素通過調控選擇素-P的表達抑制破骨細胞分化的研究.pdf
- 雷公藤內酯醇對大鼠卵泡細胞凋亡的影響.pdf
- 雷公藤紅素通過ROS-JNK通路誘導骨肉瘤細胞凋亡和自噬的研究.pdf
- 雷公藤紅素調控肝臟脂代謝的研究.pdf
- 雷公藤紅素逆轉K562-A02細胞多藥耐藥的實驗研究.pdf
- 雷公藤紅素誘導人急性髓系白血病HL-60細胞凋亡及其機制研究.pdf
- T4噬菌體誘導腫瘤相關巨噬細胞M1型再極化作用的研究.pdf
- 雷公藤紅素對人膽管癌TFK-1細胞株抑制作用的實驗研究.pdf
評論
0/150
提交評論