雷公藤紅素對人膽管癌TFK-1細胞株抑制作用的實驗研究.pdf

1、本文主要分三部分進行了介紹：
　　第一部分
　　雷公藤紅素對膽管癌細胞增殖和細胞周期的影響
　　目的:觀察雷公藤紅素對人膽管癌細胞株 TFK-1細胞生長抑制情況及對細胞周期的影響。
　　方法:采用細胞增殖-毒性檢測試劑盒(CCK-8)測定不同濃度的雷公藤紅素干預后,膽管癌細胞株 TFK-1在24h、48h、72h時間段的活力和增殖變化,計算生長抑制率及IC50;雷公藤紅素孵育 TFK-1細胞不同時間段后,進行 P

2、I染色,用流式細胞儀測定細胞周期改變,并觀察有無出現(xiàn)凋亡峰。
　　結果:
　　1.雷公藤紅素對 TFK-1細胞生長的抑制呈現(xiàn)出明顯的時間和劑量依賴性,細胞活力和增殖能力隨著孵育時間延長和劑量增加而逐漸下降,三個時間段的IC50分別為3.67μg/ml(24h)、1.98μg/ml(48h)、1.33μg/ml(72h);
　　2.雷公藤紅素干預后,細胞周期出現(xiàn)明顯改變,24h即可見 G2/M期阻滯,72h后最為明顯,但

3、并未出現(xiàn) Sub-G1峰。
　　結論:
　　1.雷公藤紅素可在體外抑制TFK-1細胞生長,并具有明顯的時間、劑量依賴性;
　　2.雷公藤紅素可以顯著調控 TFK-1細胞周期,其中G2/M期阻滯最為顯著,在延長孵育時間后,效果可獲增強。
　　第二部分
　　雷公藤紅素對膽管癌細胞凋亡及其相關蛋白表達的影響
　　目的:觀察雷公藤紅素對人膽管癌細胞株 TFK-1細胞凋亡的影響,并測定體外藥物干預后細胞凋亡相關

4、蛋白(Apoptosis-related proteins)表達變化,初步探討雷公藤紅素抑制TFK-1細胞生長的可能機制。
　　方法:采用Annexin V-FITC/PI雙染法對雷公藤紅素(2μg/ml)干預不同時間段(24h、48h和72h)后的TFK-1細胞進行染色,用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況;雷公藤紅素孵育 TFK-1細胞48h后,提取細胞總蛋白,采用Western Blot測定細胞凋亡相關蛋白表達改變。
　　結果

5、:
　　1.Annexin V-FITC/PI雙染結果提示,雷公藤紅素干預后 TFK-1細胞出現(xiàn)凋亡,呈時間依賴性,72h凋亡率可達56.01％,早凋多于晚凋;
　　2.Western Blot檢測顯示凋亡蛋白抑制因子 Survivin及Bcl-2表達下調,促凋亡蛋白 Bax及Caspase-3表達上調。
　　結論:
　　1.雷公藤紅素可以誘導 TFK-1細胞凋亡,并呈時效關系;
　　2.雷公藤紅素通過 C

6、aspase依賴的線粒體途徑誘導 TFK-1細胞凋亡,其機制與下調 Survivin及Bcl-2蛋白表達,和上調 Bax及Caspase-3蛋白表達密切相關。
　　第三部分
　　雷公藤紅素對膽管癌荷瘤鼠抗腫瘤作用及機制初探
　　目的:觀察雷公藤紅素對膽管癌荷瘤鼠腫瘤生長的抑制作用,并測定體內藥物干預后移植瘤中凋亡相關蛋白表達情況,進一步探討雷公藤紅素抗膽管癌作用的可能機制。
　　方法:建立膽管癌的裸鼠皮下移植瘤模

7、型,經(jīng)腹腔注射雷公藤紅素(1,2 mg/kg/day)后定期測量荷瘤鼠的腫瘤體積變化及體重改變,計算腫瘤生長抑制率;給藥結束后處死荷瘤鼠,提取腫瘤組織蛋白,經(jīng) Western Blot測定凋亡相關蛋白表達情況。
　　結果:
　　1.在體內,雷公藤紅素2個濃度組均表現(xiàn)出抑制腫瘤生長的作用,高劑量組更為顯著(p<0.01),抑瘤率可達49.71％;兩個劑量組均未出現(xiàn)藥物相關的裸鼠死亡,但高劑量組出現(xiàn)荷瘤鼠體重下降、腹瀉現(xiàn)象;

8、r>　　2.藥物干預后體內凋亡相關蛋白表達情況與體外一致,Survivin及Bcl-2表達受抑,Bax及Caspase-3表達上調,并呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴關系。
　　結論:
　　1.雷公藤紅素可以顯著抑制體內腫瘤生長,并呈現(xiàn)明顯的量效關系,但高劑量可以出現(xiàn)一定毒副作用,其安全性有待進一步評估;
　　2.雷公藤紅素可在體內外通過調節(jié)凋亡相關蛋白表達水平來誘導 TFK-1細胞凋亡,可能經(jīng)由 NF-κB信號傳導通路發(fā)揮其抗腫