雷公藤紅素對腫瘤細胞中缺氧誘導因子-1α及荷瘤小鼠腫瘤生長的影響.pdf

1、目的：缺氧誘導因子HIF-1α是惡性腫瘤發(fā)生的一個重要因子，本文探討雷公藤紅素對人肝癌細胞Hep3B中HIF-1α活化的影響，為雷公藤紅素抗腫瘤藥物的開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：肝癌細胞Hep3B、宮頸癌細胞Hela、胃癌細胞SK-Hep1給予不同濃度的雷公藤紅素（Celastrol）并缺氧誘導箱中孵育，蛋白免疫印跡（Western Blot）檢測雷公藤紅素（Celastrol）對HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性的影響；氯化鈷（CoCl2）

2、模擬Hep3B缺氧模式，Western Blot法證明雷公藤紅素對Hep3B中HIF-1α的活化的影響；蛋白質(zhì)合成抑制劑（Cycloheximide）和蛋白質(zhì)降解抑制劑（MG-132）等方法來檢測雷公藤紅素對Hep3B中HIF-1α合成和降解的影響；通過反轉(zhuǎn)錄鏈式聚（RT-PCR）反應檢測雷公藤紅素對HIF-1α下游靶基因血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），EPO
　　mRNA的表達水平的影響；雙熒光素酶報告基因法（Luciferase

3、）檢測雷公藤紅素對Hep3B-HRE中HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性的影響；噻唑藍比色分析法（MTT）檢測雷公藤紅素對Hep3B增殖的影響；細胞體外侵襲實驗（in vitro invasion）檢測雷公藤紅素對Hep3B侵襲和轉(zhuǎn)移的影響；將宮頸癌細胞移植裸鼠皮下，建立裸鼠皮下移植瘤模型，灌胃給予不同劑量的雷公藤紅素，觀察雷公藤紅素對裸鼠接種腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的影響及在中對裸鼠組織中HIF-1α的影響并繪制腫瘤生長曲線；采用蛋白免疫印跡法驗證雷公藤紅素

4、對裸鼠體內(nèi)組織中HIF-1α活性的影響；
　　結果：雷公藤紅素呈劑量依賴性抑制了缺氧模式下的Hep3B、Hela、SK-Hep1中HIF-1α的表達水平；雷公藤紅素呈劑量依賴性抑制了COCl2模擬Hep3B缺氧中HIF-1α的表達水平；雷公藤紅素對Hep3B中HIF-1α的合成有抑制作用，并具有時間依賴性抑制，但對其降解不影響；雷公藤紅素呈劑量依賴性抑制了Hep3B中VEGF、EPO mRNA的表達水平；MTT法和Lucifera

5、se說明雷公藤紅素對Hep3B的增殖基本沒有影響并具有藥物活性；通體體外侵襲實驗說明雷公藤紅素呈劑量依賴性抑制了Hep3B的侵襲和轉(zhuǎn)移的能力；雷公藤紅素對裸鼠皮下移植瘤的生長呈明顯的抑制作用，并呈現(xiàn)劑量依賴性的抑制，同時對裸鼠的心，對肝臟，脾，肺腎，實體腫瘤組織中HIF-1α蛋白質(zhì)均呈現(xiàn)出劑量依賴性的抑制。
　　結論：雷公藤紅素具有抗腫瘤作用，對HIF-1α的合成有作用但對HIF-1α的降解不起作用，從而從新的視覺闡明腫瘤發(fā)生發(fā)展