藤黃酸通過(guò)激活ROS-JNK信號(hào)通路誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]
　　中藥藤黃取自藤黃科植物藤黃樹分泌的干燥樹脂，性寒，味酸、辛、澀，主治癰疽腫毒，頑癬惡瘡。藤黃酸(gambogic acid，GA)是中藥藤黃的主要活性成份，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)其具有廣譜抗腫瘤活性，有效抑制包括肺癌、肝癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等腫瘤細(xì)胞的增殖，但GA抑制肺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制尚未完全闡明。
　　本研究以非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株為研究模型，觀察GA對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，分析GA對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞ROS含量、JN

2、K信號(hào)通路活性、線粒體膜電位及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，探討GA誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。
　　[實(shí)驗(yàn)方法]
　　體外培養(yǎng)人非小細(xì)胞肺癌H1975、H292和H460細(xì)胞，MTT實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度GA作用細(xì)胞24、48和72h對(duì)其增殖的影響;Annexin V-FITC/PI雙染法分析GA作用24h后對(duì)H1975細(xì)胞凋亡率的影響，DFCH-DA法分析GA對(duì)H1975細(xì)胞ROS含量的影響，JC-1探針染色分析GA作用16

3、h后H1975細(xì)胞線粒體膜電位的變化，及Western blot實(shí)驗(yàn)分析GA作用對(duì)JNK信號(hào)通路活性和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　[結(jié)果]
　　GA呈劑量-時(shí)間依賴抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，其中H1975細(xì)胞對(duì)GA較為敏感，不同濃度（0.5、1、2.5、5μM）的GA作用24h后，存活率分別為91.8％±5.1％、63.7％±3.8％、31.5％±4.8％、10.6％±2.7％，作用48h后，存活率分別為89.1％±5.

4、4％、41.5％±4.1％、12.2％±3.2％和8.9％±2.1％，作用72h后，存活率分別為84.1％±6.4％、18.5％±3.2％、7.2％±2.0％和6.8％±1.3％。1、2.5和5μM GA作用H1975細(xì)胞24h的凋亡率分別為25.2％、51.8％和75.1％，剪切型凋亡相關(guān)蛋白caspase9、caspase3和PARP的表達(dá)隨GA濃度增高而顯著增加。GA作用2h，H1975細(xì)胞ROS含量顯著升高，磷酸化JNK(p-J