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文檔簡(jiǎn)介
1、[目的]
中藥藤黃取自藤黃科植物藤黃樹分泌的干燥樹脂,性寒,味酸、辛、澀,主治癰疽腫毒,頑癬惡瘡。藤黃酸(gambogic acid,GA)是中藥藤黃的主要活性成份,現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)其具有廣譜抗腫瘤活性,有效抑制包括肺癌、肝癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等腫瘤細(xì)胞的增殖,但GA抑制肺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制尚未完全闡明。
本研究以非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株為研究模型,觀察GA對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用,分析GA對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞ROS含量、JN
2、K信號(hào)通路活性、線粒體膜電位及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,探討GA誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。
[實(shí)驗(yàn)方法]
體外培養(yǎng)人非小細(xì)胞肺癌H1975、H292和H460細(xì)胞,MTT實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度GA作用細(xì)胞24、48和72h對(duì)其增殖的影響;Annexin V-FITC/PI雙染法分析GA作用24h后對(duì)H1975細(xì)胞凋亡率的影響,DFCH-DA法分析GA對(duì)H1975細(xì)胞ROS含量的影響,JC-1探針染色分析GA作用16
3、h后H1975細(xì)胞線粒體膜電位的變化,及Western blot實(shí)驗(yàn)分析GA作用對(duì)JNK信號(hào)通路活性和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
[結(jié)果]
GA呈劑量-時(shí)間依賴抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng),其中H1975細(xì)胞對(duì)GA較為敏感,不同濃度(0.5、1、2.5、5μM)的GA作用24h后,存活率分別為91.8%±5.1%、63.7%±3.8%、31.5%±4.8%、10.6%±2.7%,作用48h后,存活率分別為89.1%±5.
4、4%、41.5%±4.1%、12.2%±3.2%和8.9%±2.1%,作用72h后,存活率分別為84.1%±6.4%、18.5%±3.2%、7.2%±2.0%和6.8%±1.3%。1、2.5和5μM GA作用H1975細(xì)胞24h的凋亡率分別為25.2%、51.8%和75.1%,剪切型凋亡相關(guān)蛋白caspase9、caspase3和PARP的表達(dá)隨GA濃度增高而顯著增加。GA作用2h,H1975細(xì)胞ROS含量顯著升高,磷酸化JNK(p-J
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